Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 10263
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Ludmila Tavares e Almeida |
| Orientador | ANDREA DE OLIVEIRA BARROS RIBON |
| Outros membros | Higor Sette Pereira, TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES, Vitória Fernandes |
| Título | Predição de epítopos de célula B no genoma de Neospora caninum para construção de proteína quimérica e sua utilização no diagnóstico de neosporose bovina |
| Resumo | Neosporose bovina é uma doença parasitaria causada pelo protozoário Neospora caninum. Os principais sintomas provocados pela infecção são abortos, retornos ao cio, queda da produtividade, alta mortalidade de bezerros neonatos, descarte prematuro de matrizes e deformidades anatômicas. Atualmente, os exames laboratoriais existentes para diagnóstico se baseiam em técnicas histopatológicas, imunológicas e moleculares. Um método eficiente e de custo acessível para diagnosticar o animal em tempo hábil para tratamento é um dos principais desafios do produtor. O presente trabalho teve como objetivo identificar proteínas no genoma de N. caninum com alta densidade de epítopos lineares de célula B preditos e avaliar seu potencial para o diagnóstico para neosporose quando combinadas em uma proteína quimérica. Através do banco de dados NCBI, foi obtido o proteoma do N. caninum e, a partir de ferramentas de bioinformática, foram selecionadas as proteínas de menor peso molecular. Posteriormente, proteínas com alta densidade de epítopos lineares de células B foram selecionados pelo webserver BepiPred 1.0, adotando um threshold igual à 1.3, o que confere uma maior especificidade, evitando assim a seleção de falsos epítopos. Regiões de alta densidade de epítopos foram isoladas e combinadas para construção de uma quimera, otimizada para expressão em vetor pET28a e sintetizada quimicamente (Códon IDT). Em seguida, procedeu-se com a transformação do vetor adquirido em Escherichia coli Arctic Express, sendo imediatamente confirmada por PCR, gerando um produto de aproximadamente 500 pb. Após, testou-se a expressão heteróloga da proteína pelo sistema bacteriano por SDS-PAGE, sendo esta expressão confirmada por Western-Blotting utilizando anticorpo anti-histidina. Seguidamente, procedeu-se com a purificação da proteína em sistema FPLC, que foi confirmada por SDS-PAGE pela presença da banda de 25 kDa. A proteína foi utilizada em ensaios de ELISA fornecendo um diagnóstico específico (100%) e sensível (100%) quando em contato com soro de bovinos infectados, em detrimento aos soros saudáveis e contaminados com demais patógenos de bovinos. Os resultados sugerem proteína quimérica possui um elevado potencial antigênico para atuar no diagnóstico sorológico da neosporose bovina e outros estudos também poderão ser feitos a fim de avaliar o potencial imunogênico e seu consequente uso em vacinas. |
| Palavras-chave | Neosporose, sorodiagnóstico, quimérica |
| Forma de apresentação..... | Painel |