Resumo |
Proteínas e polissacarídeos são os principais componentes de inúmeras formulações farmacêuticas, cosméticas e alimentícias. Entretanto, este grande potencial científico e tecnológico só será completamente explorado se compreendermos a termodinâmica de interação entre estas macromoléculas. Deste modo, o objetivo do trabalho foi avaliar a termodinâmica de interação entre a lactoferrina (LF) e κappa-carragena (κC), utilizando a técnica de Espectroscopia de Fluorescência (EF). Os experimentos foram conduzidos em um espectrofotômetro de fluorescência Cary Eclipse (Agilent Technologies, EUA), excitando a LF em 295 nm. Titulou-se solução de LF com diferentes volumes de uma solução estoque de κC (3,0x10-4 mol L-1), mantendo a concentração da proteína fixa no sistema (2,0x10-5 mol L-1). As constantes de interação (Kb) foram obtidas nas temperaturas de 20⁰C, 25⁰C e 30⁰C para obtenção dos demais parâmetros termodinâmicos (ΔH°, TΔS°, ΔG°). O aumento da [κC] no sistema induziu uma diminuição progressiva intensidade de fluorescência da LF, de 327 para 97 a.u., sugerindo que o polissacarídeo interage com LF. A fim de prever o mecanismo de supressão, os dados de intensidade de fluorescência foram analisados usando a equação de Stern Volmer, enquanto os valores da constante bimolecular de supressão (Kq) foram calculados por meio da equação Kq=Ksv/t0, para t0 igual a 10-8 s. Apesar dos valores de Ksv terem aumentado com o incremento da temperatura (1,24x104 M-1-1,06x104 M-1), os valores de Kq foram da ordem de 1012 M-1s-1, se mostrando maiores que a constante de supressão colisional máxima de dispersão (2x1010 M-1s-1), revelando que o mecanismo de supressão foi estático. Confirmada a formação de complexo entre a LF e κC, os dados de supressão de fluorescência foram ajustados ao modelo de duplo logaritmo modificado (log(F0-F)/F=logKb+nlog[κC]). Os valores de Kb em diferentes temperaturas foram usados para calcular ΔG⁰ (ΔG⁰=-RTlnKb), e pela aproximação de Van’t Hoff os valores de ΔH⁰ foram obtidos. Já os valores de TΔS⁰ foram determinados por meio da relação fundamental de Gibbs (ΔG⁰=ΔH⁰-TΔS⁰). Os valores de ΔG⁰ (-24,8; -24,0; -22,9 kJ mol-1) indicam que o equilíbrio é deslocado para a formação do complexo LF-κC, o qual é desestabilizado pelo aumento da temperatura. Já os valores negativos de ΔH⁰ (-80,4 kJ mol-1) mostraram que a formação dos agregados entre LF e κC é exotérmica e favorecida por fatores entálpicos. Por fim os valores negativos de ΔH⁰ e ΔS⁰ sugerem que a interação entre a LF e a κC ocorre por meio de ligações de hidrogênio e interações eletrostáticas. Conclui-se que a κC interage com a LF formando um complexo, que ocorre principalmente por interações eletrostáticas e ligações de hidrogênio. |