Ciência para a Redução das Desigualdades
15 a 20 de outubro de 2018
Trabalho 10014
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Ciências Biológicas |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Sérgio Barreto Queiroz Junior |
| Orientador | ANDREA DE OLIVEIRA BARROS RIBON |
| Outros membros | Camila Aparecida Profeta, Lis Souza Rocha, TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES |
| Título | Identificando Polimorfismos de Nucleotídeo Único em Genes que Codificam Fatores de Virulência de Staphylococcus aureus |
| Resumo | Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) é uma variação de um nucleotídeo encontrado em indivíduos de uma espécie que pode levar a modificações na sequência de aminoácidos das proteínas. Estudos demonstraram que a presença de SNP no promotor do gene hla em Staphylococcus aureus estava relacionada à hiperprodução da toxina alfa, o que permitiu, posteriormente, a identificação de bactérias mais prováveis de causarem mastite bovina severa. Considerando que S. aureus também causa mastite subclínica que resulta em grandes perdas na pecuária leiteira, tem-se tentado identificar características que permitam a identificação de cepas associadas a esse tipo de manifestação. Este trabalho teve por objetivo identificar SNPs presentes em genes que codificam fatores de virulência de S. aureus de origem bovina e avaliar seu efeito no fenótipo bacteriano. Os SNPs foram detectados utilizando CLC Genomics Workbench por mapeamento das reads dos isolados sequenciados no genoma da cepa referência causadora de mastite clínica S. aureus RF122, aplicando limites de qualidade de base e cobertura mínima de 20x. Para os isolados SAU170, SAU302, SAU1269 e SAU1364, todos associados à mastite subclinica, foram analisados o número de SNPs que resultam em troca de aminoácido em relação ao RF122. SAU1269 apresentou o maior número de SNPs não sinônimos (180), seguido por SAU170 (170), SAU302 (161) e SAU1364 (82). Genes que codificam adesinas foram os que apresentaram maiores variações, em especial o gene fnbpA de SAU1269, com 27 SNPs não sinônimos. Cinquenta isolados bacterianos foram selecionados para a realização de ensaios que pudessem avaliar o efeito das variações nos fenótipos. Inicialmente, foi avaliado o gene srtA, que codifica a proteína sortase, cuja função é ancorar adesinas à parede celular. Embora a análise in silico tenha revelado muitos SNPs não sinônimos, não foi observada diferença fenotípica significativa entre os isolados bacterianos estudados. A avaliação da sequência do gene clfA, que codifica o fator de aglutinação A, revelou a ocorrência de um SNP não sinônimo na região que corresponde à porção N2 da proteína, e ensaios de aglutinação permitiram a separação dos isolados em grupos. O SNP foi confirmado pela técnica de PCR dCAPS, porém não houve relação entre a presença do SNP e alteração no fenótipo de aglutinação, uma vez que isolados positivos para aglutinação apresentaram presença ou ausência do SNP. Os isolados bacterianos também foram avaliados quanto à atividade de nuclease uma vez que alguns SNPs não sinônimos foram encontrados no gene nuc. Três isolados apresentaram alta atividade, porém a confirmação dos SNPs via PCR dCAPs ainda está em andamento. |
| Palavras-chave | Staphylococcus aureus, SNP, fatores de virulência |
| Forma de apresentação..... | Painel |