Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8988
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Pós-graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Microbiologia |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Cleonice Aparecida Salgado |
| Orientador | MARIA CRISTINA DANTAS VANETTI |
| Outros membros | Felipe Alves de Almeida, François Baglinière |
| Título | Purificação de uma lipase termorresistente secretada por Serratia liquefaciens L135 |
| Resumo | As lipases são catalisadores versáteis com muitas aplicações como aditivos em alimentos, em produtos químicos e farmacêuticos, detergentes, tratamento de águas residuais, cosméticos, processamento de couro e ensaios biomédicos. O mercado global de enzima cresce cada dia mais e, com base no volume de vendas, as lipases são o terceiro maior grupo neste setor. O objetivo deste trabalho foi avaliar a termoestabilidade da lipase secretada por S. liquefaciens L135 e purificar esta enzima. S. liquefaciens L135 foi inoculada em caldo BHI e incubada a 30 °C com agitação de 150 rpm durante 24 h para a produção de lipase extracelular. Para avaliar a estabilidade térmica da enzima, o sobrenadante foi submetido a temperaturas de 80, 90 e 100 °C por 1, 3, 5 e 10 min e, após o tratamento, a atividade lipolítica foi determinada usando o substrato p-Nitrofenilpalmitato. Este composto, ao ser hidrolisado pela lipase, libera p-Nitrofenol, que é detectado a 410 nm. Foi feita a zimografia para estimar a massa molecular da lipase, utilizando o substrato fluorescente metilumbeliferil-butirato. O processo de purificação consistiu em precipitação da enzima com sulfato de amônio; ressuspenção em tampão fosfato de sódio pH 7,5; ultrafiltração em Amicon, com membrana de 30 kDa e cromatografia de exclusão molecular. Por fim, foi feita a análise em gel SDS-Page, para averiguar a pureza da lipase. Após os tratamentos de 80, 90 e 100 °C por 10 min, a lipase manteve cerca de 42, 35 e 29% da sua atividade, respectivamente. Em zimograma, a banda referente à ação da lipase apresentou massa molecular de, aproximadamente, 60 kDa. No processo de purificação a lipase precipitou com 80% de saturação de sulfato de amônio e a amostra concentrada passou em coluna Sephacryl S300-HR de exclusão molecular. As frações coletadas nos tubos numerados de 19 a 30 da cromatografia de exclusão molecular tiveram um pico de atividade lipolítica. A mistura destas frações aplicada no gel SDS-Page permitiu identificar uma banda de, aproximadamente, 60 kDa, correspondente a lipase encontrada por zimografia. Este resultado mostra que S. liquefaciensL135 secreta uma lipase que possui atividade depois de tratamentos térmicos e que o processo de purificação adotado foi eficiente. |
| Palavras-chave | Serratia liquefaciens, lipase, enzima termorresistente |
| Forma de apresentação..... | Oral |