Resumo |
INTRODUÇÃO: As rações para monogástricos formuladas com sementes de leguminosas e cereais possuem grande parte do fósforo indisponível na forma de fitato, um fator antinutricional que diminui a absorção de íons e nutrientes essenciais pelos animais. A incorporação de fitases à ração é fundamental para acrescer a disponibilidade de fósforo, mas seu alto custo de produção limita a disseminação de seu uso no Brasil. OBJETIVO: analisar o efeito da temperatura, pH e íons metálicos na atividade de fitases produzidas pela levedura Kluyveromyces marxianus. MATERIAS E METODOS A levedura foi cultivada via fermentação submersa em meio YEPG por 24 h. O extrato obtido foi fracionado via precipitação por sulfato amônio e as frações de 60% e 80% foram dialisadas e utilizadas para os ensaios. A atividade de fitases foi avaliada nas temperaturas de 10 a 80 ºC, em pH 7,0, em soluções com pH de 2,5 a 9,0, a 28 ºC, e na presença de 2 e 4 mM dos sais AgSO4, CaCl2, CaCO3, CaSO4, CuSO4, MgCl2, NH4Cl, ZnSO4. RESULTADOS: A enzima presente na fração de 60% apresentou atividade estável abaixo de 30 e acima de 70 ºC e foi estável em praticamente toda a faixa de pH testada, exprimindo atividade máxima em pH 3,5. Em contraste, a enzima presente na fração de 80% possui estabilidade em todas as temperaturas avaliadas, com um pico máximo em 70 ºC. Ela foi consideravelmente inibida nas faixas de pH ≥ 4,5, mas apresentou alta atividade em pH ácido (≤ 4,0). Essas condições são ideais para a atuação dessas enzimas no estômago dos animais. A adição dos sais NH4Cl, MgCl2, CaSO4, CaCO3, CaCl2 e ZnSO4 estimulou a atividade da fitase na fração de 60%, enquanto CuSO4 e AgSO4 causaram inibição parcial. A fitase presente na alíquota de 80% foi fortemente inibida por AgSO4, CaCO3, CaSO4, CuSO4, MgCl2, NH4Cl e ZnSO4, indicando que a primeira se adaptaria melhor a diferentes matrizes de rações. CONCLUSÃO: A enzima presente na fração de 60% apresentou características ideais para o emprego em rações de monogástricos, devido a sua alta atividade em meios contendo variada gama de íons, flexibilidade em diferentes valores de pH e temperatura ótima de catálise próximo à temperatura fisiológica (37 ºC). A enzima presente na alíquota de 80% necessitaria ser adaptada para uso em rações devido a sua baixa tolerância aos íons utilizados, comuns nesse tipo de alimento, mesmo possuindo atividade em pH gástrico ≤ 4,5 e atividade regular nas diferentes faixas de temperatura. |