Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8641
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Valquíria Joana Medina Pinheiro |
| Orientador | HUMBERTO JOSUE DE OLIVEIRA RAMOS |
| Outros membros | EDVALDO BARROS, ELIZABETH PACHECO BATISTA FONTES, Flaviane Silva Coutinho |
| Título | Marcação isobárica de peptídeos e proteínas intactas por iTRAQ e quantificação por espectrometria de massas do tipo LC-MS e MALDI-TOF/TOF. |
| Resumo | A soja é um dos grãos mais importantes para o agronegócio brasileiro e o quarto grão mais produzido mundialmente. Porém, nos últimos anos, grandes prejuízos foram registrados em sua produção devido a períodos de seca no país. A tolerância de plantas à seca decorre de mecanismos que incluem alterações fisiológicas, morfológicas e de desenvolvimento das plantas. No contexto de manipulação genética, para obter genótipos tolerantes à seca, mudanças específicas no perfil de proteínas oferecem possibilidade de identificação e caracterização funcional das proteínas cujas funções biológicas estão diretamente relacionadas à tolerância, levando ao entendimento dos mecanismos moleculares que governam as respostas ao estresse hídrico. Avanços tecnológicos no sequenciamento de proteínas têm permitido o desenvolvimento de métodos de análise proteômica, marcados pela caracterização de perfis proteicos e quantificação de proteínas. Neste contexto, o método de marcação isobárica de proteínas com o kit iTRAQ foi desenvolvido para quantificar proteínas provenientes de amostras diferentes, em uma única análise, por LC-MS e MALDI-TOF/TOF. A técnica é atualmente muito utilizada para quantificação proteica a partir de peptídeos trípticos, mas pouco se encontra na literatura sobre a marcação de proteínas intactas. A quantificação e identificação de proteínas a partir de peptídeos é um processo complexo pois, a digestão enzimática das proteínas gera alta abundância de peptídeos pequenos, o que pode mascarar a presença dos menos abundantes. Por outro lado, ao marcar proteínas intactas, os reagentes isobáricos modificam os resíduos de lisina impedindo a quebra pela tripsina e assim, obtém-se peptídeos maiores em menos abundância, sendo este método vantajoso. Porém a técnica apresenta algumas limitações que foram avaliadas neste trabalho, com o objetivo de esclarecer e contribuir para o desenvolvimento de um protocolo eficiente de estudo do proteoma utilizando a marcação isobárica de proteínas intactas com iTRAQ. Para isto, amostras proteicas de folhas de soja dos genótipos selvagem e geneticamente modificado para resistência à seca (sojaBiP), tiveram suas proteínas marcadas com isóbaros e reunidas para análise. Os métodos utilizados foram: marcação de peptídeos trípticos; marcação de proteínas intactas; separação de proteínas por eletroforese monodimensional, bidimensional e focalização isoelétrica OFF-GEL e, por fim, análises por LC-MS e MALDI TOF/TOF. Os resultados mostraram que o processo de marcação com iTRAQ foi efetivo tanto para peptídeos quanto para proteínas intactas, porém a separação eletroforética de proteínas intactas marcadas com os reagentes isobáricos apresentou limitações que ainda estão para ser otimizadas e, podem estar relacionadas com a solubilidade das proteínas frente aos reagentes do kit, ou ainda com os métodos de dessalinização e quantificação utilizados durante o processo. |
| Palavras-chave | proteômica, marcação isobárica, iTRAQ |
| Forma de apresentação..... | Painel |