Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8639
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Raíssa Gomes de Andrade |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Geniana da Silva Gomes, Luciana de Souza Fernandes, Maria Roméria da Silva |
| Título | Construção de vetores para expressão recombinante de SRPK1 e versões truncadas de SRPK2 em células de mamíferos |
| Resumo | Serine-arginine protein kinases (SRPKs) são reguladores do splicing do pré-mRNA. Essas proteínas são altamente específicas em reconhecer e fosforilar proteínas SR em regiões ricas em repetições de dipeptídeos serina-arginina, denominados domínios RS. Em mamíferos a família das SRPKs é composta por quatro membros: SRPK1, SRPK1a (isoforma de SRPK1), SRPK2 e SRPK3. As SRPKs se caracterizam por apresentar uma longa região espaçadora bipartindo o domínio cinase. Essas cinases são encontradas no núcleo e no citoplasma e sua distribuição celular é regulada pela região espaçadora e por fosforilação. Por serem capazes de migrar entre o núcleo e o citoplasma da célula, as SRPKs são consideradas centrais na transdução do sinal de EGF (fator de crescimento epidermal) e na reprogramação do splicing alternativo. As SRPKs estão envolvidas em processos patológicos como o câncer. Apresentam expressão alterada, podendo ser sub ou superexpressas em tumores. Existem, até o momento, poucas interações proteína-proteína conhecidas para SRPK2. A busca por novas interações pode auxiliar no entendimento das suas funções no câncer. Diante dessa necessidade, um ensaio de duplo híbrido realizado por nosso grupo de pesquisa identificou a interação da região espaçadora de SRPK2 com proteínas envolvidas em angiogênese, migração e invasão celular, os quais são processos de grande relevância em câncer. Para estudar essas potenciais interações é importante clonar os insertos de DNA que codificam para SRPK1, SRPK2 e as truncações de SRPK2 em vetor para expressão em célula de mamífero. O inserto de DNA codificante para SRPK2 já foi clonado. Logo, o objetivo deste trabalho foi clonar os fragmentos de DNA que codificam para SRPK1 e as truncações de SRPK2 (S-SRPK2, N-SRPK2 e ∆N∆S-SRPK2) em vetor para expressão em célula de mamífero. N-SRPK2 é o fragmento de DNA codificante para o domínio N-terminal de SRPK2 (aa 1-77). S-SRPK2 corresponde ao inserto de DNA codificante para a região espaçadora de SRPK2 (aa 224-526). ∆N∆S-SRPK2 corresponde ao inserto de DNA resultante da deleção de parte do domínio N-terminal (aa 1-50) e da região espaçadora de SRPK2 (aa 257-507). Cada inserto de DNA foi amplificado por PCR utilizando primers específicos e clonado no vetor de clonagem pGEM-T Easy. Os clones foram confirmados por PCR e digestão com enzimas de restrição. Após a confirmação, os insertos de DNA foram subclonados no vetor para expressão em célula de mamífero, pCDNA5/FRT/TO. Esses clones também foram confirmados por PCR e digestão enzimática. Em seguida, todos os clones foram identificados e confirmados por sequenciamento. Os clones serão utilizados em ensaios de interação proteína-proteína, tais como imunoprecipitação, para avaliar com qual domínio de SRPK2 as proteínas parceiras interagem, e se essas proteínas também interagem com SRPK1. |
| Palavras-chave | SRPKs, Clonagem, Expressão em células de mamíferos |
| Forma de apresentação..... | Painel |