Resumo |
A tuberculose bovina é uma doença infectocontagiosa causada pela bactéria Mycobacterium bovis que afeta os mamíferos, como humanos e ruminantes, levando a perda na ordem de três milhões de dólares no setor agropecuário. É de fácil transmissão, sendo disseminada em leite, fezes, urina e também pelo sêmen. A inalação dos bacilos de M. bovis causa lesões nos pulmões e com a progressão da doença atinge também outros órgãos, debilitando o animal, levando à perda da produtividade e óbito, pois não há tratamento disponível para a doença. A melhor forma de controlar a infecção por M. bovis é adotar medidas de higiene, como a assepsia das instalações e prevenção do contato do agente etiológico com animais. Os animais infectados, positivos nos testes de detecção da bactéria, devem ser sacrificados. O diagnóstico clínico é de difícil realização pois a doença apresenta sinais inespecíficos ou vestígios que se manifestam em estágios avançados da infecção. Já o diagnóstico anatomopatológico, cujo objetivo é identificar lesões específicas da doença nos tecidos do animal, só é realizado após a morte, sendo apenas confirmativo. O diagnóstico definitivo para tuberculose bovina se baseia na identificação do agente por técnicas microbiológicas que são demoradas e de baixa sensibilidade. O método mais utilizado é o teste cutâneo por tuberculinas, que se baseia na resposta imunológica do animal infectado, que apesar de rápido e factível não diferencia as espécies de Mycobacterium, podendo apresentar reações cruzadas com outros microrganismos e indicar resultados falso-positivos após susceptíveis sensibilizações. O objetivo do trabalho é identificar proteínas no genoma de M. bovis com alta densidade de epítopos lineares de célula B preditos e avaliar seu potencial para o diagnóstico de tuberculose bovina. Para realizar a predição de epítopos no genoma de Mycobacterium bovis utilizou-se o programa BepiPred com threshold adotado de 1.3 para minimizar a seleção de falsos epítopos. As proteínas que continham epítopos preditos foram então comparadas pelo programa BLASTp com o proteoma de Mycobacterium tuberculosis e de outros agentes infecciosos de bovinos como Trypanosoma vivax, Neospora caninum e Leptospira a fim de selecionar apenas as proteínas específicas da espécie M. bovis. Utilizou-se o SignalP para identificar potenciais proteínas expostas ao sistema imune do hospedeiro com capacidade de induzir anticorpos. Como resultados prévios, foi selecionada uma proteína específica de M. bovis não secretada e duas proteínas específicas para o gênero Mycobacterium e secretadas. Em todas as proteínas foram confirmadas as regiões de epítopos previamente preditas. Em seguida, foi desenhada a sequência dos primers para clonagem no vetor pET-28a, inseridos pelas enzimas de restrição NheI e HindIII. Por fim, espera-se expressar as proteínas com alta densidade de epítopos específicos em E. coli, testar a reatividade com amostras bovinas e avaliar o potencial de diagnóstico. |