Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8600
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Geniana da Silva Gomes |
| Orientador | GUSTAVO COSTA BRESSAN |
| Outros membros | Luciana de Souza Fernandes, Maria Roméria da Silva |
| Título | Produção da Serine Arginine Protein Kinase 2 e Swiprosin-1 em bactérias para ensaios de interação in vitro |
| Resumo | Serine Arginine Protein Kinases (SRPKs) são específicas em reconhecer fosforilar proteínas SR e estão envolvidas na regulação do splicing alternativo do pré-mRNA. A família das SRPKs é composta por SRPK1, SRPK1a (isoforma de splicing de SRPK1), SRPK2 e SRPK3. A desregulação da expressão e atividade dessas cinases tem sido relacionada a processos patológicos, como o câncer. SRPK2, particularmente, é encontrada superexpressa principalmente em câncer de cólon e leucemia. A SRPK2 possui uma região N-terminal rica em prolina e uma longa região espaçadora, que possivelmente é a região pela qual a cinase é regulada. Um ensaio de duplo híbrido em levedura realizado por nosso grupo de pesquisa mostrou a possível interação entre SRPK2 e swiprosin-1. A atividade de swiprosin-1 é dependente de seu estado de fosforilação e a principal função de dessa proteína é regular o acesso de cofilina aos filamentos de F-actina. A estrutura de swiprosin-1 inclui o domínio EF-hand no qual íons Ca2+ se ligam, e regiões desordenadas na extremidade N-terminal. Swiprosin-1 é superexpressa em diferentes tumores como melanoma e câncer de cólon. A superexpressão induzida de swiprosin-1 influencia a reorganização do citoesqueleto e actina e aumenta a migração celular, podendo favorecer o processo de metástase. Nesse sentido, ensaios envolvendo a interação entre SRPK2 e swiprosin-1 são relevantes para um maior entendimento da relação entre essas proteínas no câncer. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivos a clonagem do cDNA codificante para swiprosin-1 em vetor para expressão em sistema procarioto (pET28a/GST/TEV) e a realização do ensaio de pull down para confirmar a interação SRPK2/swiprosin-1. Swiprosin-1 foi clonada em pET28a/GST/TEV e sua expressão fusionada à proteína GST (GST-swiprosin-1) foi induzida em Escherichia coli BL21. As condições para indução dessa proteína foram padronizadas em utilização de 0,1 mM de IPTG e incubação a 37 °C por 2 h. A expressão de his-SRPK2 e de GST em E. coli BL21 também foi realizada. A partir da expressão das proteínas recombinantes foi realizado o ensaio de pull down utilizando a resina His-Select Nickel Affinity Gel e as frações solúveis contendo GST-swiprosin-1 e his-SRPK2 ou GST e his-SRPK2. A proteína GST livre em contato com his-SRPK2 foi utilizada como controle negativo da interação. Para detecção das proteínas foi realizado western bloting utilizando os anticorpos primários anti-His e anti-GST. A comprovação da interação entre swiprosin-1 e SRPK2 permitirá novos estudos que investiguem mais profundamente a relação entre essas proteínas no contexto fisiológico e patológico, contribuindo para o entendimento de novas funções das cinases SRPKs. |
| Palavras-chave | Interação, SRPK-2, Pull down |
| Forma de apresentação..... | Oral, Painel |