Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8530
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Entomologia Agrícola |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Samuel Lessa Barbosa |
| Orientador | MARIA GORETI DE ALMEIDA OLIVEIRA |
| Outros membros | Jenny Dimelza Gomez Arrieta, Juan Diego Rios Diez, Roberta Ribeiro Coura, Thiago Rodrigues Dutra |
| Título | Identificação da atividade inibitória para serino e cisteino proteases da hemolinfa de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Noctuidae) |
| Resumo | Os inibidores de proteases estão em todos os eucariotos, em algumas plantas e vírus. Tais inibidores são de importância fundamental na regulação dos processos biológicos, limitando a ação das proteases. Eles podem ser de ampla ação, como as enzimas digestivas e os fatores de virulência de patógenos, ou de substrato específicos, no caso dos componentes de uma cascata enzimática. Em diversas espécies de insetos, encontram-se inibidores de proteases em múltiplos tecidos, por exemplo, no tegumento, nas gônadas, nas glândulas salivais e na hemolinfa. Os presentes neste último, desencadeiam uma reação em cascata, que, no momento em que há uma invasão de micro-organismos, sua ação permite controlar a infecção. Tal regulação é feita por meio do controle das enzimas proteolíticas, pelo qual o sistema reconhece os patógenos, regula a coagulação da hemolinfa, gera a síntese de peptídeos antimicrobianos e a melanização para encapsulação dos patógenos. O objetivo deste trabalho foi determinar se a hemolinfa de Anticarsia gemmatalis contêm inibidores de proteases ativos. Para isso foi coletada, com ajuda de micropipeta Pasteu, a hemolinfa de 300 lagartas, no segundo dia do quinto instar, de A. gemmatalis. Para realização desta coleta, foram cortadas os últimos pares de falsas pernas abdominais das lagartas. Para evitar a ativação das fenoloxidases e, por consequência, a coagulação, o fluido foi misturado com feniltiouréia (PTU), na proporção 1:50 (PTU: Hemolinfa), e levado a centrifugação 15.000 rpm/15 min, para eliminar os hemócitos presentes. Imediatamente foi obtido 5 mL do plasma ou Hemolinfa Livre de Hemócitos (HLH). O HLH foi submetido à cromatografia por afinidade, para separar as serino proteases de todas as outras proteínas presentes. Foram realizados ensaios de inibição de cisteíno e serino proteases com as frações obtidas. Para aquelas que deram resultado positivo para a inibição, foi determinado o perfil proteico em poliacrilamida de uma dimensão (1D) e duas dimensões (2D). Das 60 frações coletadas na cromatografia pela coluna de afinidade Benzamidina, 18 obtiveram uma inibição maior ou igual que 30% para serino proteases. Enquanto que para cisteíno proteases, apenas seis frações apresentaram inibição maior ou igual que 30%. No perfil proteico por géis de 1D e 2D foi identificado um padrão onde, provavelmente, estão as proteínas com a atividade inibitória, variando de 38 a 49 KDa, em uma faixa de ponto isoelétrico (pI) entre 4,6 e 6,9. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que há inibidores ativos na hemolinfa da lagarta-da-soja. |
| Palavras-chave | Lagarta-da-soja, cromatografia, inibição enzimática. |
| Forma de apresentação..... | Oral, Painel |