Resumo |
A lisozima de clara de ovo apresenta distintas aplicações na indústria alimentícia e farmacêutica, devido principalmente às suas propriedades antimicrobianas. Diferentes técnicas de purificação desta biomolécula tem sido estudadas, cujo principal objetivo é obter elevado grau de pureza e eficiência de separação. Dentre estas técnicas, a cromatografia líquida por afinidade se destaca pela alta seletividade pela molécula a ser capturada, contribuindo para a redução do número de etapas no processo de separação. Ao mesmo tempo, a escolha do material a ser utilizado como suporte cromatográfico é um fator importante na eficiência de separação. Os Criogéis são géis poliméricos monolíticos formados em condições de congelamento, apresentam estrutura esponjosa com poros contínuos e interconectados, possuem elevada porosidade, que em alguns casos pode ser superior a 90% e apresentam maior permeabilidade ao escoamento e baixas quedas de pressão. Tal característica é altamente desejável na purificação de macromoléculas a partir de meios viscosos, uma vez que a elevada perda de carga em colunas tradicionais é um fator que pode limitar o seu uso. Neste trabalho, foi produzido um criogel supermacroporoso de poliacrilamida e modificado quimicamente pela incorporação de moléculas de tris (hidroximetil aminometano), cujo objetivo foi a captura direta de lisozima de clara de ovo, em diferentes condições de pH. As características morfológicas da coluna foram determinadas apresentando uma estrutura esponjosa, com poros de tamanhos variados entre 10 a 100 micrômetros, com porosidade igual a 97%. A permeabilidade ao escoamento foi igual a 5,9x10-13 m2 e os coeficientes de dispersão axial, em diferentes velocidades superficiais da fase móvel situaram-se entre 10-8 e 10-5 m2/s. A capacidade de captura da lisozima usando clara de ovo foi avaliada em função do pH. Verificou-se que o pH de 7,5 foi mais eficiente para a captura, obtendo valores superiores de lisozima adsorvida (31,2 mg/g de gel) e maiores valores de atividade específica (62207 U/mg). O valor médio do grau de pureza das amostras foi igual a 81%. Tendo em vista os resultados apresentados, pode se concluir que foi possível a captura e purificação da lisozima diretamente da clara de ovo usando criogel supermacroporoso ativado com tris para cromatografia por interação específica. |