Resumo |
A lisozima é uma enzima com elevado potencial de uso nas indústrias farmacêutica e de alimentos devido à sua atividade antimicrobiana. Sua purificação por processos rápidos, com custos reduzidos e menor impacto ambiental e, ao mesmo tempo, podendo conferir um elevado grau de pureza é de grande interesse. Leitos monolíticos poliméricos supermacroporosos são um avanço e uma promessa nesse sentido, possibilitando o uso de soluções mais concentradas e menos clarificadas, devido à elevada permeabilidade e porosidade que possuem. Tais suportes cromatográficos, produzidos em condições de temperatura abaixo de zero, são denominados criogéis. Neste trabalho foi produzido uma coluna monolítica através da co-polimerização de acrilamida e bisacrilamida, sob temperatura de -12 oC (criogel). Em seguida, a matriz cromatográfica foi ativada com 2-Acrylamido-2-methylpropane sulfonic acid (AMPSA), um agente de troca catiônica. A coluna foi inicialmente caracterizada em relação ao escoamento hidrodinâmico do fluido em seu interior, sendo determinado sua permeabilidade e coeficiente de dispersão axial. Em seguida, esta coluna foi usada para captura e purificação de lisozima a partir de soluções de clara de ovo diluídas, nas proporções 1:2, 1:7 e 1:18, com solução-tampão de fosfato de sódio 0,02 mol⋅L-1 e pH 7,2. A clara de ovo foi previamente preparada para retirada da ovomucina, de forma a reduzir sua viscosidade e evitar entupimento da coluna. A eluição foi feita adicionando-se 1,0 mol⋅L-1 de NaCl ao tampão. Na etapa de purificação de lisozima da clara de ovo com o trocador catiônico produzido, conseguiu-se até 78% de rendimento e um fator de purificação próximo a 32, em uma única etapa cromatográfica. O uso de leitos monolíticos supermacroporosos na purificação de lisozima mostrou-se promissor, permitindo o uso de soluções de alimentação mais concentradas em um processo com um reduzido número de etapas. Com isso é possível a redução de custos e do consumo de água requerido, minimizando o impacto ambiental do processo. |