Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8406
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Parasitologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Clara Almeida Barcelos |
| Orientador | CLAUDIO LISIAS MAFRA DE SIQUEIRA |
| Outros membros | Ananda Pereira Aguilar |
| Título | Padronização de protocolos para análise da expressão gênica de enzimas chave de Amblyomma sculptum infectados com Rickettsia amblyommii através de RT-PCR |
| Resumo | Os carrapatos são artrópodes hematófagos obrigatórios capazes de parasitar uma vasta gama de vertebrados silvestres e domésticos, inclusive o homem. Dentre as principais espécies de importância médico-veterinária destaca-se o Amblyomma sculptum, principal transmissor da Rickettsia rickettsii no Brasil. Esta bactéria pode causar a Febre Maculosa Brasileira (FMB), doença de alta letalidade que se enquadra entre os agravos de notificação compulsória. Este trabalho teve como objetivo padronizar os protocolos para análise da expressão gênica de enzimas chave nas principais vias metabólicas do carrapato A. sculptum frente a infecção com R. amblyommii, bactéria não patogênica. Inicialmente houve tentativa de estimar a quantidade ideal de órgãos (glândulas salivares e intestinos) dos carrapatos para extração de RNA. Em seguida esse RNA foi tratado com DNAse (Promega) e, para verificar a eliminação do DNA contaminante, as amostras foram submetidas à análise de PCR utilizando primer específico para A. sculptum. Posteriormente foi realizada a síntese de cDNA utilizando a enzima transcriptase reversa M-MuLV M0253S (New England BioLabs). Para análise da expressão gênica por RT-PCR foi previamente realizado o desenho dos primers referente às enzimas de relevância da interação da Rickettsia com A. sculptum, utilizando o Primer 3 plus. A partir dos primers selecionados realizou-se a eficiência de amplificação, utilizando diluições seriadas de cDNA e, realizando o cálculo através da fórmula 10(-1/slope)-1. Na extração das amostras não houve diferença relevante na concentração de RNA entre as quantidades de 10 e 20 unidades de intestinos, enquanto a quantidade necessária de glândulas salivares foi determinada como 30 unidades. As amostras de RNA que apresentaram ausência de banda no PCR do gene específico de A. sculptum foram as tratadas eficientemente com DNAse. Em seguida foi realizada a síntese de cDNA que foi utilizada no experimento da curva de eficiência da reação. Alguns primers de enzimas-alvo não tiveram eficiência de amplificação semelhante aos genes endógenos. Assim, a partir desse trabalho, a quantidade necessária dos órgãos para extração de RNA foi estipulada como de 10 unidades para intestinos e 30 unidades para glândulas salivares de fêmeas de carrapatos A. sculptum, concluindo-se, pela análise da eficiência de amplificação, que o cálculo para expressão gênica deverá utilizar o método da curva padrão relativa. |
| Palavras-chave | Rickettsia, Amblyomma, PCR quantitativo |
| Forma de apresentação..... | Painel |