Resumo |
A fim de minimizar os efeitos nocivos ocasionados pela excessiva síntese de espécies reativas de oxigênio (ROS) no processo de criopreservação utilizou-se a melatonina como antioxidante, a fim de diminuir os danos às membranas e acionar os mecanismos de capacitação espermática e reação acrossomal. Nesse estudo avaliou-se via citometria de fluxo, o efeito de diferentes concentrações de melatonina em distintas concentrações espermáticas na criopreservação de sêmen caprino. Foram coletados quatro reprodutores caprinos, sendo seis ejaculados por animal. A concentração espermática e a adição de melatonina ao diluente foram assim distribuídas: T1: Controle 40 X 106 sem adição de melatonina, T2: 40 X 106 com 1 μM, T3: 40 X 106 com 100 μM, T4: Controle 80 X 106 sem adição de melatonina, T5: 80 X 106 com 1 μM, T6: 80 X 106 com 100 μM, T7: Controle 100 X 106 sem adição de melatonina, T8: 100 X 106 com 1 μM e T9: 100 X 106 com 100 μM. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria a 37ºC por trinta segundos, seguido da avaliação da integridade de membrana plasmática dos espermatozoides via sonda iodeto de propídeo (IP), a qual cora o núcleo celular em vermelho quando há membrana lesionada. Para avaliação da integridade acrossomal foi utilizada a aglutinina Pisumsativum com isotiocionato de fluoresceína (FITC-PSA), corando em verde, somente aqueles espermatozoides reagidos ou com acrossoma lesionado. Foram analisadas dez mil células por amostra e dispostas em quatro categorias: IP+PSA-, espermatozoides com membrana plasmática lesionada; IP+PSA+, espermatozoides com membrana plasmática e acrossomal lesionada; IP-PSA+, espermatozoides com acrossoma lesionado; e IP-PSA-, espermatozoides com membrana plasmática e acrossomal íntegras, sendo as médias analisadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Diferentes concentrações de melatonina, não provocaram diferenças nos valores médios da população de espermatozoides com membrana plasmática e acrossomal íntegras PSA-IP+ (sem adição: 28.82 ± 1.25, 1 μM: 31.15 ± 1.68, 100 μM: 28.74 ± 1,26); PSA+IP+ (sem adição: 41.21 ± 1.9, 1 μM: 40.54 ± 2.12, 100 μM: 43.05 ± 1.98); PSA+IP- (sem adição: 1.03 ± 0.29, 1 μM: 0.84 ± 0.11, 100 μM: 2.11 ± 0.74) e PSA-IP- (sem adição: 28.94 ± 1.88, 1 μM; 27.48 ± 1.81, 100 μM: 26.10 ± 1.81). As populações de células não apresentaram diferenças entre as concentrações espermáticas 40 X 106 (PSA+IP+: 40.64 ± 2.09, PSA+IP-: 1.58 ± 0.60, PSA-: 57.78 ± 1.99), 80 x 106 (PSA+IP+: 41.19 ± 2.05, PSA+IP-: 0.86 ± 0.12, PSA-: 57.95 ± 2.01) e 100 x 106 (PSA+IP+: 42.96 ± 1.92, PSA+IP-: 1.54 ± 0.51, PSA-: 55.50 ± 1.97). Observou-se que não houve diferença na integridade de membrana plasmática e acrossomal espermática com a adição de melatonina, porém outros parâmetros devem ser analisados para inferir o efeito benéfico da melatonina na criopreservação de sêmen caprino. |