Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 8003
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Wassali Valadares de Sousa |
| Orientador | MARIA CRISTINA BARACAT PEREIRA |
| Outros membros | Lavínia Martins da Silva, PAULO ROBERTO GOMES PEREIRA, Renato Lima Senra |
| Título | Peptídeos de defesa em sementes de soja germinadas para uso biotecnológico |
| Resumo | Peptídeos antimicrobianos (AMPs) de plantas são pouco conhecidos quanto à variabilidade e mecanismos de ação. No agronegócio, há interesse nos AMPs como membros da defesa constitutiva e induzida de plantas, e como agentes para desenvolver compostos de defesa para a proteção de sementes armazenadas, plantas em cultivo protegido, além de possível aplicação como medicamentos para a indústria veterinária. Técnicas peptidômicas previamente desenvolvidas no Laboratório de Proteômica e Bioquímica de Proteínas/DBB/UFV revelaram a presença de peptídeos em sementes de soja (Glycine max [L.] Merrill, var. UFV16) germinadas por 48h (SS-48). As frações peptídicas apresentaram importantes atividades contra os fitopatógenos Ralstonia solanacearum (Gram-negativos) e Clavibacter michiganensis ssp. michiganensis (Gram-positivo), o que mostrou-se biotecnologicamente interessante dada a disponibilidade de material-fonte a baixo custo. Esse trabalho visa identificar o perfil eletroforético bidimensional de peptídeos e proteínas de baixas massas moleculares (<30kDa) presentes nas sementes SS-48. As sementes germinadas (três grupos de 5 sementes) foram trituradas com nitrogênio líquido e maceradas em Tris-HCl contendo inibidores de proteases (1:15, g:mL), o homogenato foi centrifugado e o sobrenadante foi precipitado (1:6, ml:ml) com TCA 10% (v/v) em acetona gelada com DTT. Após lavagens com acetona/DTT e etanol, as amostras foram ressuspendidas em CHAPS, ureia e tioureia, e a proteína foi determinada método do coomassie blue. SDS-PAGE 14% mostrou bandas intensas na região entre 8 e 30 kDa, de interesse. Géis bidimensionais, usando metodologia adaptada para separar peptídeos e proteínas de baixas massas moleculares (<30kDa) vêm sendo desenvolvidos em fitas IPG pH3-10, 7 cm. Após revelação, digitalização e análise das imagens em Image Master 2D Platinum 7.0 (GE Healthcare, USA), os spots na região de baixa massa molecular serão extraídos, descorados, tripsinizados e analisados em MALDI-TOF/TOF (MS e MS/MS, Bruker Daltonics). Os peptídeos e as proteínas serão identificadas por diferentes ferramentas computacionais adaptadas a moléculas pequenas. Os resultados serão analisados com vistas a gerar conhecimento da fisiologia de defesa da soja por peptídeos e visando desenvolver agentes de defesa de plantas. Apoio financeiro e técnico: FAPEMIG, CNPq, CAPES, FINEP, NUBIOMOL, BIOAGRO. |
| Palavras-chave | Peptídeos antimicrobianos, soja, eletroforese bidimensional |
| Forma de apresentação..... | Oral |