Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano

23 a 28 de outubro de 2017

Trabalho 7999

ISSN 2237-9045
Instituição Universidade Federal de Viçosa
Nível Graduação
Modalidade Pesquisa
Área de conhecimento Ciências Biológicas e da Saúde
Área temática Bioquímica
Setor Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular
Bolsa FAPEMIG
Conclusão de bolsa Não
Apoio financeiro FAPEMIG, FUNARBE
Primeiro autor Aramis do Carmo da Silva
Orientador TIAGO ANTONIO DE OLIVEIRA MENDES
Outros membros ANDREA DE OLIVEIRA BARROS RIBON, Higor Sette Pereira, Priscila Gonçalves Ferreira
Título Desenvolvimento de novo método de detecção de resíduos de antimicrobianos em leite baseado na tecnologia de aptâmeros de DNA
Resumo Aptâmeros são oligonucleotídeos com tamanho variando entre 70 a 100 nucleotídeos e podem ser de DNA ou RNA. Os aptâmeros podem se ligar a diferentes biomoléculas incluindo carboidratos, proteínas e lipídeos e seu uso em relação a anticorpos é bem vantajoso devido à maior vida útil, baixo custo de produção, fácil síntese e manipulação. Aptâmeros são identificados utilizando a metodologia SELEX (Evolução Sistémica de Ligantes por Enriquecimento Exponencial), que consiste em uma biblioteca de oligonucleotídeos geradas aleatoriamente e utiliza ciclos iterativos para a seleção de sondas que se liguem especificamente a um alvo. A metodologia SELEX deve ser bem planejada, envolve muitos ciclos de seleção, muitas semanas para se obter bons resultados, passível de erros e apresenta custo elevado. Devido aos desafios de aplicação do método de SELEX, é de grande necessidade a criação de um software gerador de aptâmeros contra alvos específicos. O objetivo do presente estudo é criar um software que simule a metodologia SELEX, consistindo de uma iteração simples de amostragem e classificação de sequências tendo como parâmetro de seleção a entropia relativa mínima. Inicialmente a estrutura da proteína ou pequeno ligante tais como antibióticos de interesse é carregado no software, uma caixa delimitadora é gerada baseada nos valores de mínimos e máximos das coordenadas cartesianas x, y e z da estrutura 3D do alvo. As posições dentro da caixa delimitadora serão preenchidos por nucleotídeos dA, dG, dC e dT adicionados a partir de uma distribuição uniforme e aleatória. Nucleotídeos com conformações desfavoráveis, caracterizadas pela interseção com o alvo ou próprio aptâmero serão descartados. Os nucleotídeos com entropia relativa mínima mais baixa serão selecionados. As etapas de criação da caixa delimitadora e distribuição aleatória e uniforme de nucleotídeos foram findados com êxito confirmado pelo plug-in Add solvation box do programa VMD. As próximas etapas será utilizar o programa autodock e autodock Vina implementado na plataforma PyRx para otimização de modo de ligação entre nucleotídeos e alvos. Também serão utilizados métodos de dinâmica molecular para cálculo de energia livre e seleção de nucleotídeos da sequência de aptâmeros finais. A presente metodologia será utilizada para produzir uma sonda contra his-tag e sondas contra antibióticos para compor um teste rápido de identificação desta analito no leite. Os aptâmeros produzidos serão comparados com anticorpos comerciais anti-his e contra testes rápidos de detecção de antibióticos no leite para avaliar a eficiência, especificidade e sensibilidade de detecção.
Palavras-chave aptâmero, software gerador de aptâmeros, entropia relativa mínima
Forma de apresentação..... Painel
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