Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano

23 a 28 de outubro de 2017

Trabalho 7962

ISSN 2237-9045
Instituição Universidade Federal de Viçosa
Nível Pós-graduação
Modalidade Pesquisa
Área de conhecimento Ciências Biológicas e da Saúde
Área temática Imunologia
Setor Departamento de Biologia Geral
Bolsa CAPES
Conclusão de bolsa Não
Apoio financeiro CAPES
Primeiro autor Ingrid Marques Dias
Orientador SERGIO OLIVEIRA DE PAULA
Outros membros John Willians Oliveira Prates, Mariana Fonseca Xisto, Vinicius Medina Pinheiro
Título Clonagem do gene da proteína não-estrutural 1 (ns1) do Zika vírus em pPICZαA para expressão heteróloga em levedura Pichia pastoris
Resumo Introdução: O Zika vírus (ZIKV), descoberto em 1947 na Uganda, é capaz de causar efeitos deletérios nos sistemas nervoso periférico e central (Síndrome de Guillain-Barré e Microcefalia congênita) além de diversas manifestações clínicas no indivíduo infectado. É um arbovírus pertencente à família Flaviviridae, e ao gênero Flavivirus constituído por RNA de cadeia simples e polaridade positiva. Seu genoma origina uma poliproteína composta por três proteínas estruturais (M, E e C) e sete proteínas não-estruturais (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b e NS5). A proteína NS1, utilizada em diversos estudos como marcador diagnóstico na infecção por flavivírus, participa do processo replicativo viral e desempenha funções na resposta imune do hospedeiro. Objetivo: Clonar o gene da proteína NS1 do Zika vírus no vetor de expressão pPICZαA. Metodologia: O vetor de expressão será utilizado para expressão gênica em levedura Pichia pastoris, visando a produção heteróloga de antígenos virais para ensaios imunológicos. Para tal foi adquirido o vetor de clonagem pUC57 com a sequência gênica da proteína NS1 otimizada para expressão em leveduras. Primeiramente os plasmídeos pUC57_NS1ZIKV e pPICZαA foram multiplicados em células E. coli TOP10F e extraídos pelo método de lise alcalina. Em seguida, foi realizada uma digestão dupla em ambos os plasmídeos nos sítios de restrição para as enzimas EcoRI e NotI. As bandas referentes ao inserto NS1ZIKV e ao vetor pPICZαA digeridos, foram excisadas e purificadas a partir do gel de agarose, através do Qiaquick Gel Extraction kit. A clonagem então foi realizada através da ligação do gene no vetor de expressão pela enzima T4 ligase, e, por fim, o plasmídeo resultante pPICZαA_NS1ZIKV foi utilizado para transformação genética de E. coli TOP10F. Resultados: A transformação bacteriana com o plasmídeo pPICZαA_NS1ZIKV foi confirmada por meio de PCR e digestão plasmidial. Conclusão: O ZIKV cada vez mais vem sendo alvo de diversas pesquisas, e o presente trabalho é um exemplo de como a engenharia genética pode ser utilizada para promover avanços na área da saúde.
Palavras-chave Zika, NS1, Pichia pastoris
Forma de apresentação..... Painel
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