Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 7962
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Pós-graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Imunologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | CAPES |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES |
| Primeiro autor | Ingrid Marques Dias |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | John Willians Oliveira Prates, Mariana Fonseca Xisto, Vinicius Medina Pinheiro |
| Título | Clonagem do gene da proteína não-estrutural 1 (ns1) do Zika vírus em pPICZαA para expressão heteróloga em levedura Pichia pastoris |
| Resumo | Introdução: O Zika vírus (ZIKV), descoberto em 1947 na Uganda, é capaz de causar efeitos deletérios nos sistemas nervoso periférico e central (Síndrome de Guillain-Barré e Microcefalia congênita) além de diversas manifestações clínicas no indivíduo infectado. É um arbovírus pertencente à família Flaviviridae, e ao gênero Flavivirus constituído por RNA de cadeia simples e polaridade positiva. Seu genoma origina uma poliproteína composta por três proteínas estruturais (M, E e C) e sete proteínas não-estruturais (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b e NS5). A proteína NS1, utilizada em diversos estudos como marcador diagnóstico na infecção por flavivírus, participa do processo replicativo viral e desempenha funções na resposta imune do hospedeiro. Objetivo: Clonar o gene da proteína NS1 do Zika vírus no vetor de expressão pPICZαA. Metodologia: O vetor de expressão será utilizado para expressão gênica em levedura Pichia pastoris, visando a produção heteróloga de antígenos virais para ensaios imunológicos. Para tal foi adquirido o vetor de clonagem pUC57 com a sequência gênica da proteína NS1 otimizada para expressão em leveduras. Primeiramente os plasmídeos pUC57_NS1ZIKV e pPICZαA foram multiplicados em células E. coli TOP10F e extraídos pelo método de lise alcalina. Em seguida, foi realizada uma digestão dupla em ambos os plasmídeos nos sítios de restrição para as enzimas EcoRI e NotI. As bandas referentes ao inserto NS1ZIKV e ao vetor pPICZαA digeridos, foram excisadas e purificadas a partir do gel de agarose, através do Qiaquick Gel Extraction kit. A clonagem então foi realizada através da ligação do gene no vetor de expressão pela enzima T4 ligase, e, por fim, o plasmídeo resultante pPICZαA_NS1ZIKV foi utilizado para transformação genética de E. coli TOP10F. Resultados: A transformação bacteriana com o plasmídeo pPICZαA_NS1ZIKV foi confirmada por meio de PCR e digestão plasmidial. Conclusão: O ZIKV cada vez mais vem sendo alvo de diversas pesquisas, e o presente trabalho é um exemplo de como a engenharia genética pode ser utilizada para promover avanços na área da saúde. |
| Palavras-chave | Zika, NS1, Pichia pastoris |
| Forma de apresentação..... | Painel |