Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 7910
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade do Estado de Minas Gerais |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Química |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Debora Castro de Souza |
| Orientador | FIlippe Elias de Freitas Soares |
| Outros membros | Elias Honorato Gomes, JOSE HUMBERTO DE QUEIROZ, Samara Silveira Moreira |
| Título | Avaliação do perfil enzimático do látex de Synadenium grantii |
| Resumo | Synadenium grantii é uma planta do genero Euphorbia comumente encontrada no Brasil. Ela é conhecida como Janaúba ou Leitosinha e produz látex com uso tradicional em tratamento de feridas e doenças gástricas. O látex da planta é um fluido viscoso rico em diversos compostos, tais como proteínas, alcalóides, açúcares e enzimas. De modo análogo a outras plantas, o látex de S. grantii também é rico em proteases. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o perfil enzimático do látex de S. grantii. O látex de S. grantii foi coletado de espécimes nativas de Viçosa, Minas Gerais, Brasil. Para a sua obtenção, o caule da planta foi cortado superficialmente e o látex foi imediatamente coletado em microtubos e mantido à 4 ºC. Após essa extração, a amostra foi congelada (-20 ºC) e posteriormente centrifugada a 10.000 g, a 4 ºC por 30 minutos, com o objetivo de remover partículas e concentrar as enzimas. Após esse processo, ensaios enzimáticos de protease e quitinase foram realizados para se identificar em qual das fases as enzimas se encontravam. A atividade proteolítica foi medida pelo método caseinolítico. Os volumes das soluções utilizadas nesse método foram: 20µl de amostra, 480µl de tampão e 500µl de caseína 1% pH 8.0. A reação foi interrompida com a adição de 1 ml de solução de ácido tricloroacético (TCA) 10%. Após o intervalo de 10 minutos, o meio de reação foi centrifugado a 10.000g por 5 minutos e o sobrenadante coletado para a determinação da absorbância em espectrofotômetro a 280nn. Uma unidade de protease será definida como a quantidade de enzima necessária para liberar 1,0 µg de tirosina por minuto. A atividade de quitinase foi mensurada por meio da medida de açúcares redutores (DNS). A quantidade de açúcares redutores liberados foi determinada pela absorvância a 540 nm. Uma curva padrão de N-acetilglucosamina foi construído através da variação da sua concentração. Uma unidade de quitinase foi definida como a quantidade de enzima necessária para liberar 1,0 µmol de N-acetilglucosamina por minuto nas condições do ensaio. Além disso, foi realizada uma análise eletroforética por meio de SDS-PAGE 10%. O gel foi corado com Coomassie Blue para a visualização das proteínas. A atividade de protease foi encontrada no sobrenadante límpido, obtendo-se um valor de 530 ± 46 U/mL. No entanto, não foi encontrada atividade de quitinase em nenhuma das fases, apesar de vários látex provenientes de plantas apresentarem alta atividade dessa enzima. Por outro lado, sugere-se a presença específica da glicoproteína serino protease (LGP), por meio da análise eletroforética. No entanto, outras duas serino proteases descritas na literatura não foram encontradas. Assim, os autores sugerem estudos mais aprofundados sobre as proteases do látex de S. grantii, devido ao seu potencial biotecnológico. |
| Palavras-chave | Synadenium grantii , protease, quitinase |
| Forma de apresentação..... | Painel |