Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 7618
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Lavínia Martins da Silva |
| Orientador | MARIA CRISTINA BARACAT PEREIRA |
| Outros membros | Italo de Andrade Bianchini, Lavínia Aparecida Martin, Renato Lima Senra, Wassali Valadares de Sousa |
| Título | Purificação visando caracterizar HEV-CANN, um peptídeo antimicrobiano tipo hevein-like |
| Resumo | Peptídeos antimicrobianos (AMPSs) vegetais são importantes componentes da defesa de plantas, e caracterizam-se por serem em geral pequenos (até 10kDa), ricos em resíduos de cisteínas e ligações dissulfeto, catiônicos, e por apresentarem ação contra fitopatógenos como parte da defesa constitutiva e induzida. Plantas da família das solanáceas têm se mostrado importantes fontes de AMPs. Pesquisa prévia no Laboratório de Proteômica e Bioquímica de Proteínas dessa Universidade identificou o peptídeo nomeado HEV-CANN (heveina-like) de pimentão (Capsicum annuum) da variedade comercial 'Magali R', com ação antifúngica e antibacteriana. O pimentão é um alimento muito consumido e que recebe grande quantidade de produtos químicos durante o cultivo, havendo interesse em conhecer o potencial dos AMP na defesa das plantas. O objetivo desse trabalho é purificar e confirmar a sequência primária de HEV-CANN, visando proceder caracterizações estruturais e funcionais para aplicações biotecnológicas futuras. O extrato preparado a partir de folhas de pimentão foi separado por cromatografia de fase reversa em resina C18 Shim-Pack CLC-ODS (Shimadzu, Japão) em equipamento HPLC semi-preparativo (Waters Corporation). A coluna foi equilibrada com solução de ácido trifluoroacético (TFA) 0,1% e as proteínas foram eluídas em gradiente descontínuo crescente de acetonitrila 80%, a 1,0 mL min-1. Frações correspondendo aos picos de interesse foram coletadas com base no perfil cromatográfico a 214 e 280 nm. Os picos selecionados seguiram para a cromatografia de exclusão molecular em coluna analítica Protein Pack 60 Å (Waters Corporation), em HPLC (faixa de separação de 2 a 10 kDa), equilibrada e eluída em tampão Tris-HCl 25 mM, pH 7,0, acrescido de NaCl 250 mM, a 0,1 mL min-1. As amostras coletadas seguiram para análises em espectrometria de massas (MS) do tipo MALDI-TOF/TOF, em equipamento Ultraflex III (Bruker Daltonics), no Núcleo de Análises de Biomoléculas da UFV, usando matriz ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico em placa de aço MTP Anchor Chip TM 600/384 TF (Bruker Daltonics). Constatou-se a identidade do peptídeo no pico obtido, em alto grau de pureza. A amostra vem sendo submetida a sequenciamento por MS e as frações puras do peptídeo estão sendo utilizadas para avaliar a potencialidade do agente antimicrobiano. Estudos de modelagem molecular usando Phyre2 e Geno3D confirmaram a similaridade da estrutura de HEV-CANN com o AMP heveína de Hevea brasiliensis. Novas extrações e purificações serão necessárias para estudar mecanismos de ação, visando estudos para aplicação biotecnológica. |
| Palavras-chave | peptídeos, solanáceas, espectrometria de massas |
| Forma de apresentação..... | Oral, Painel |