Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 7596
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Imunologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Victória Kanadani Campos Poltronieri |
| Orientador | LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA |
| Outros membros | Christiane Eliza Motta Duarte, Patrick Fernandes da Silva, SILVIA ALMEIDA CARDOSO |
| Título | Expressão heteróloga da lectina isolada de Brassica oleracea var. Botrytis |
| Resumo | Recentemente nosso grupo identificou e caracterizou uma nova lectina isolada de Brassica oleracea var. Botrytis denominada BOL, essa lectina foi caracterizada bioquimicamente como uma proteína não glicosilada, de massa molecular 34 kDa, termoestável até 60 ºC e atividade ótima em pH 7 e 8. Ensaios preliminares demonstram que a fagocitose e a produção NO por macrófagos foram estimuladas na presença da lectina BOL, desta maneira, essa lectina pode ser explorada como possível agente imunoestimulador. Entretanto, a quantidade de proteína nativa recuperada no processo de purificação limita o número de ensaios biológicos que podem ser realizados. Desta maneira a expressão heteróloga de lectinas é uma estratégia para solucionar o problema de difícil obtenção dessas proteínas diretamente da planta, processo este que inclui etapas laboriosas e onerosas de extração e purificação e não garante alto rendimento da proteína. Desse modo, o presente estudo visou expressar essa lectina em larga escala com o objetivo de avaliar os efeitos imunoestimulatórios sobre as células do sistema imune. Para tanto, padronizamos o processo de fermentação para crescimento da linhagem produtora de BOL recombinante. Padronizamos o tempo de indução e observamos que a melhor produção se dá após 24h, com agitação de 220 rpm, incubando a uma temperatura de 37ºC e induzido a produção da proteína recombinante com 0,4 mM de IPTG. A proteína recombinante obtida sob essas condições foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de agarose-Ni através do tag de hexahistidina e eluida com 300mM de imidazol em fluxo constante de 1ml/minuto. A proteína purificada apresentou um bom rendimento, aproximadamente 2 mg/L de cultura e a pureza da preparação foi avaliada por eletroforese em gel de poliacrilamida 12% em condições desnaturantes. A lectina recombinante BOL apresentou apenas uma banda na altura de 34 kDa se mostrando com elevado grau de pureza. Concluimos que o processo de expressão heteróloga foi eficiente em produzir a lectina BOL em grande quantidade e com pureza necessária a execução dos ensaios biológicos. |
| Palavras-chave | Lectina, expressão heterologa, B. oleracea |
| Forma de apresentação..... | Painel |