Do Lógico ao Abstrato: A Ciência no Cotidiano
23 a 28 de outubro de 2017
Trabalho 7564
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Lizandra Cristina de Oliveira Figueiredo |
| Orientador | VALERIA MONTEZE GUIMARAES |
| Outros membros | Rafaela Zandonade Ventorim, WENDEL BATISTA DA SILVEIRA |
| Título | Expressão de xilanases utilizando soro de queijo como indutor e avaliação dos efeitos da imobilização na atividade enzimática |
| Resumo | As xilanases (E.C. 3.2.1.8) são glicosidases que clivam as ligações β-1,4 no esqueleto principal da xilana liberando oligômeros de xilose. Essas enzimas têm sido descritas com potencial para aplicação nas indústrias alimentícia, têxtil e de papel, entretanto os principais limitantes de sua utilização nos processos industriais são o alto custo de produção e a dificuldade em se obter enzimas resistentes às condições de temperatura e pH empregadas. As xilanases utilizadas nesse trabalho (SWT, SWT T30, SM2 e SM2 T30) foram obtidas pelo grupo de pesquisa a partir do gene da xilanase (XynA) de Orpinomyces sp. PC-2. Os objetivos desse trabalho foram: substituir o agente indutor IPTG (Isopropil-β-D-1-tiogalactopiranosídeo) pelo soro de queijo no sistema de expressão heteróloga, imobilizar as enzimas em alginato de cálcio e caracterizá-las quanto ao efeito da temperatura e pH. Na primeira etapa deste trabalho a expressão das xilanases, previamente clonadas em E. coli BL21 (DE3)RIPL, foi inicialmente induzida com lactose pura 10, 50 e 100 mM, para verificar o potencial indutor do soro de queijo. Em seguida, foi testado soro de queijo com concentração de lactose estimada em 10, 20 e 50 mM. A atividade de xilanase e concentração de açúcar redutor (lactose) no soro foram quantificadas usando o reagente ácido dinitrossalicílico (DNS) e a concentração de proteínas foi quantificada pelo método ligante de Coomassie. Na segunda etapa, as xilanases foram expressas com lactose 10 mM, imobilizadas em alginato de cálcio e a atividade de xilanase foi avaliada pela formação de açúcar redutor nas faixas de temperatura de 30-80°C e pH 2-11. Nos experimentos de indução, a atividade enzimática obtida nos testes com lactose pura foi inferior ao controle com IPTG 0,25 mM, indicando menor expressão das xilanases. Entretanto, a atividade de xilanase obtida após a indução com soro de queijo foi estatisticamente igual à atividade obtida na indução com IPTG, revelando o potencial desse subproduto dos laticínios como agente indutor em substituição ao uso do indutor sintético IPTG. Além disso, a imobilização com alginato de cálcio se mostrou interessante uma vez que ampliou a faixa de atuação das enzimas em relação à temperatura e ao pH. Dessa forma, a substituição do IPTG pelo soro de queijo se mostrou interessante para produção das xilanases em um processo menos oneroso e, com a imobilização, as enzimas adquiriram propriedades mais adequadas para diversas aplicações, principalmente nas indústrias de alimentos e em processos que permitam a recuperação das esferas para posterior reutilização. |
| Palavras-chave | xilanase, superexpressão, imobilização |
| Forma de apresentação..... | Painel |