Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 5111
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Pós-graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | CAPES |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Edvaldo Barros |
| Orientador | CLAUDIO LISIAS MAFRA DE SIQUEIRA |
| Outros membros | Carlos Emmanuel Montandon, HUMBERTO JOSUE DE OLIVEIRA RAMOS, Rafael Mazioli Barcelos, Valquíria Joana Medina Pinheiro |
| Título | Perfil da expressão proteica em glândulas salivares de carrapatos Amblyomma sculptum não infectados e não alimentados |
| Resumo | Os carrapatos da espécie Amblyomma sculptum (complexo Amblyomma cajennense) são hematófagos obrigatórios, distribuindo-se desde as áreas úmidas do norte da Argentina, Bolívia e Paraguai, até as áreas de Mata Atlântica do Brasil, situadas nos estados do Espírito Santo, Minas Gerais, Rio de Janeiro, São Paulo, sul do Paraná, Pernambuco, norte do Piauí, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e centro de Goiás. De ampla versatilidade parasitária, os carrapatos deste complexo são incriminados como os principais vetores da Rickettsia rickettsii, uma α-proteo-bactéria causadora da febre maculosa brasileira (FMB), doença de elevada letalidade, quando não adequadamente identificada e tratada. Órgão de primeiro contato com o hospedeiro vertebrado, as glândulas salivares são multifuncionais na produção e injeção de diversas moléculas, capazes de facilitar a hematofagia e modular o sistema imune do hospedeiro, facilitando a transmissão de patógenos. Neste contexto, várias lacunas permanecem inexploradas quanto ao conhecimento a respeito do funcionamento desse órgão. Visando caracterizar as proteínas expressadas e seu papel fisiológico nas glândulas salivares de A. sculptum, sob as condições de não alimentação e não infecção, foi realizado este estudo utilizando uma abordagem proteômica. Para isto, 180 machos e 180 fêmeas de A. sculptum, livres de patógenos, obtidos de colônias mantidas no Laboratório de Ixodologia da UFU, foram agrupados em lotes com 60 carrapatos, de acordo com o sexo. As glândulas salivares foram dissecadas e armazenadas em 100µL de tampão de extração (Ureia 7M, Tioureia 2M, DTT 40mM e CHAPS 4%). Posteriormente, três alíquotas de 50µg de proteínas totais do extrato de glândulas salivares de cada grupo foram separadas por SDS-PAGE 1D 12,5%. Após corado e digitalizado, o gel teve suas bandas excisadas em frações de aproximadamente 4mm, as quais foram submetidas à digestão com tripsina e, posteriormente, analisadas por RP LC-MS/MS QTOF. Os dados de MS1 e MS2 foram confrontados com o banco de dados de proteínas Chelicerata (UNIPROT) com o auxílio do aplicativo MASCOT, sendo os resultados validados e a abundância relativa das proteínas determinada pelo aplicativo SCAFFOLD. Como resultado preliminar, foram identificadas 12 proteínas, sendo as mais abundantes Putative glycine-rich cell wall structural protein 1.8, Putative conserved membrane protein e Putative glycine-rich cell wall structural protein 1. Dentre essas proteínas, duas pertencem à superfamília rica em glicina, as quais estão relacionadas, principalmente, com a formação do cone de cemento, atuando na fixação do aparelho bucal do carrapato no hospedeiro vertebrado. Com esta abordagem foi possível identificar um número pequeno de proteínas das glândulas salivares de carrapatos. Para atividades futuras, planejamos a utilização de outras abordagens com o objetivo de aumentar o número de proteínas identificadas e caracterizadas. |
| Palavras-chave | Amblyomma sculptum, proteômica, LC-MS/MS |
| Forma de apresentação..... | Painel |