Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 5103
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Microbiologia |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Primeiro autor | Cleonice Aparecida Salgado |
| Orientador | MARIA CRISTINA DANTAS VANETTI |
| Outros membros | François Baglinière |
| Título | Purificação e caracterização de uma protease termorresistente de Serratia liquefaciens |
| Resumo | Desde o início da década de 90, Pseudomonas foi o gênero de bactérias psicrotróficas reconhecido como o mais amplamente encontrado em leite cru e alguns produtos lácteos processados. Esse gênero tem capacidade de produzir a metaloprotease AprX, resistente ao calor que hidrolisa as micelas de caseína e causa a desestabilização do leite tratado termicamente durante o período de estocagem, causando prejuízos à indústria de laticínios. Até agora, essa protease é a única enzima termorresistente caracterizada no leite. Nos últimos anos, alguns estudos mostram que o gênero Serratia, principalmente a espécie Serratia liquefaciens, é frequentemente encontrada no leite cru. Essa espécie tem a capacidade de produzir a metaloprotease extracelular Ser2, cuja termorrêsistencia ainda não é bem caraterizada. Neste trabalho, a protease Ser2 produzida por S. liquefaciens proteolítica isolada do leite cru foi purificada e parcialmente caracterizada. Para isso, o gene ser2 foi clonado no plasmídeo de expressão PQE30-Xa, transformado na cepa Escherichia coli XL1-Blue, e, posteriormente, a protease foi expressa e purificada por cromatografia de afinidade. A enzima purificada apresenta massa molar estimada de 50 kDa por SDS-PAGE e possui a capacidade de hidrolisar caseína e azocaseína. A caracterização foi efetuada entre 4°C e 60°C e a protease apresentou atividade nesta ampla faixa de temperatura com atividade ótima a 37°C. Com relação à termoestabilidade, Ser2 tem uma atividade de 84%, 77% e 65% aos tratamentos de 80, 90 e 100°C por 5 minutos, respectivamente. Esses resultados mostraram que essa protease é resistente a tratamentos térmicos elevados. Para completar essa caracterização, alguns experimentos, como a avaliação da estabilidade térmica com outros tratamento térmicos usados na indústria do leite (30 minutos/65°C ; 15 segundos /72°C), a determinação do pH ótimo e a avaliação do efeito dos íons utilizando os compostos (MnSO4, CoCl2, ZnSO4 ,FeSO4, MgSO4 e FeCl3) e dos inibidores (ácido etilenodiamino (EDTA), fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF), ditiotreitol(DTT), pepstatin A e benzamidina) irão ser realizados. A caracterização desta enzima termorresistente, permitirá desenvolver técnicas de controle sobre a sua atividade proteolítica em leite e outros produtos lácteos. |
| Palavras-chave | Leite, Serratia liquefaciens, protease |
| Forma de apresentação..... | Painel |