Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 5028
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Genética e melhoramento vegetal |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Letícia Assis Barony Valadares Fonseca |
| Orientador | MAXIMILLER DAL BIANCO LAMAS COSTA |
| Outros membros | Danyelle Barbosa Mayrink, Luiz Cláudio Costa Silva, NEWTON DENIZ PIOVESAN, Rafael Delmond Bueno |
| Título | Construção e validação de marcadores HRM para a seleção de acessos de soja com baixo teor de ácido linolênico |
| Resumo | A soja (Glycine max (L.) Merrill) é a mais importante leguminosa cultivada no mundo, tendo na safra 2014/2015 produção de 318,6 milhões de toneladas no mundo. Empregado na produção de biodiesel e na alimentação humana e animal, o grão de soja apresenta cerca de 20% de óleo bruto, composto principalmente pelos seguintes ácidos graxos: ácido palmítico (16:0)-13%; ácido esteárico (18:0)-4%; ácido oleico (18:1 Δ9)-18%; ácido linoleico (18:2 Δ9,12)-55% e ácido linolênico (18:3 Δ9,12,15)-10%, sendo que, maiores teores de ácidos poli-insaturados geram redução na estabilidade oxidativa do óleo. Trabalhos anteriores identificaram os genes FAD3B e FAD3C como responsáveis pela síntese das enzimas ω-3-dessaturase, envolvidas na inserção de uma insaturação ao ácido linoleico, convertendo-o a ácido linolênico. Além disso, foram identificadas e caracterizadas mutações nestes genes para o acesso A29, genótipo com apenas 1% de ácido linolênico. O Programa de Melhoramento da Qualidade da Soja BIOAGRO/UFV visa selecionar indivíduos de maior qualidade do óleo, tendo menores teores de ácido linolênico. Posto isso, o presente trabalho teve por objetivo a construção e validação de marcadores HRM para a seleção de acessos com baixo teor de ácido linolênico. A metodologia HRM faz uso de um fluoróforo funcional quando há fita dupla, submetendo o produto de amplificação a um gradiente de temperatura, com medição em tempo real, gerando uma curva de melt. Tendo como base as mutações já caracterizadas na literatura, foram construídos conjuntos de primers a partir do software Primer3 v.0.4.0 seguindo as condições: produto de amplificação entre 60 e 120pb; tamanho do primer entre 20 e 27pb; Tm de anelamento entre 54 e 64°C; conteúdo de GC entre 30 e 70%. Após a construção, os primers foram empregados na padronização das curvas de melt, tendo os indivíduos A29 (mutante), Tucunaré (selvagem) e um indivíduo F1 (heterozigoto) gerado a partir do cruzamento entre estes como padrão. A reação de HRM foi realizada em um aparelho de PCR em tempo real, Rotor Gene-Q (QIAGEN) contendo 30 ng de DNA, 0,7 M de cada primer e 5 L do Type-it HRM PCR Kit 2X (QIAGEN), com volume total de 10 L. A PCR foi realizada nas seguintes condições: 94°C/10’; 40 ciclos iniciados a 94°C/20”, Tm por 30”, e 72°C/30”. Por fim, os produtos de amplificação foram submetidos a um gradiente de temperatura de 60 a 90°C, com aumento de 0,1°C e medição em tempo real a cada aumento, para a determinação das curvas de melt. Os conjuntos de primers desenhados amplificaram um total de 117 pb para o gene FAD3B e 73 pb para o gene FAD3C, sendo todos padronizados a Tm de 54°C. Pode-se concluir que os marcadores HRM utilizados foram eficientes para identificar indivíduos homozigotos, mutante e selvagem, e heterozigotos para a característica em estudo. Os resultados obtidos geram perspectivas para a utilização destes em um programa de retrocruzamento assistido visando a seleção de acessos com menores teores de ácido linolênico. |
| Palavras-chave | Óleo, retrocruzamentos, biodiesel |
| Forma de apresentação..... | Painel |