Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 5021
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Genética e melhoramento vegetal |
| Setor | Departamento de Fitotecnia |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Larissa Martins Mota |
| Orientador | CARLOS SIGUEYUKI SEDIYAMA |
| Outros membros | Letícia Assis Barony Valadares Fonseca, Luiz Cláudio Costa Silva, MAXIMILLER DAL BIANCO LAMAS COSTA, Rafael Delmond Bueno |
| Título | Construção e validação de um método de genotipagem para seleção de soja com baixo teor de estaquiose |
| Resumo | A soja (Glycine max (L.) Merrill) é uma das mais importantes culturas para produção de grãos destinados a indústria para obtenção de óleo e farelo. A leguminosa acumula oligossacarídeos de rafinose em suas sementes, principalmente rafinose e estaquiose, os quais são considerados fatores anti-nutricionais. A redução destes açúcares em grãos de soja é uma alternativa interessante para adequá-la ao consumo humano, melhorando a sua qualidade nutricional e alterando essas características indesejáveis. Trabalhos anteriores descreveram o locus Glyma06g18890 associado à variação nos teores de estaquiose, revelando para este gene um polimorfismo no acesso PI200508. O fenótipo mutante apresenta deleção de 3 pares de base e baixo conteúdo de estaquiose, já o acesso UFVTN105 AP é uma variedade selvagem para a característica em questão. O cruzamento entre estes acessos gerou uma população F1 contendo indivíduos heterozigotos. O objetivo deste trabalho foi padronizar uma metodologia de genotipagem para acessos de soja com reduzido conteúdo do carboidrato, e para isto construímos oligonucleotídeos com o intuito de amplificar a região que apresenta a mutação. O programa Primer 3 v. 0.4.0 foi utilizado para o desenho dos oligonucleotídeos, com os seguintes parâmetros: produto de amplificação entre 60 e 200 pb; tamanho do oligonucleotídeo 20 e 27 pb; temperatura média de anelamento entre 54 e 64 ºC; conteúdo de GC entre 30 e 70 %. O software uMELT, uma ferramenta para predição virtual de curva de desnaturação, foi utilizado para estimar a eficiência de diferenciação dos genótipos. Depois de verificada a amplificação de banda única para os oligonucleotídeos, a reação de HRM foi realizada em um aparelho para PCR em tempo real Rotor Gene-Q (QIAGEN) contendo 30 ng de DNA, 0,7 M de oligonucleotídeo e 5 L do Type-it HRM PCR Kit 2X (QIAGEN), num volume total de 10 L. A PCR foi realizada nas seguintes condições: 94 ºC por 10 minutos; 40 ciclos iniciados a 94 ºC por 20 segundos, 56 ºC por 30 segundos, e 72 ºC por 30 segundos. Por fim, os produtos de amplificação foram submetidos a um gradiente de temperatura de 60 a 90 ºC, com aumento de 0,1 ºC e medição em tempo real a cada passo, para a determinação das curvas de desnaturação. Dessa maneira, o método de genotipagem foi considerado eficiente, sendo possível identificar através das curvas de desnaturação indivíduos homozigoto selvagem, homozigoto mutante e heterozigoto. A busca por variedades de soja que apresente redução nos níveis de estaquiose é de grande interesse, sendo, portanto, um dos objetivos subsequentes em nosso Programa de Melhoramento da Qualidade da Soja BIOAGRO/UFV. |
| Palavras-chave | soja, estaquiose, desnaturação |
| Forma de apresentação..... | Painel |