Resumo |
Angiostrongylus vasorum é um nematóide parasita de cães domésticos e os canídeos selvagens que causa angiostrongilíase, doença importante na saúde pública. Apesar de alguns casos de sucesso, atualmente o controle desse parasita tem sido associado com o uso de anti-helmínticos que, embora utilizados rotineiramente, não agem muito bem sobre o parasita no hospedeiro definitivo. Alguns autores demonstraram que o uso de medidas complementares para combater helmintoses que completam seu desenvolvimento no ambiente podem ser usados como ferramentas de controle. Assim, o uso de fungos nematófagos é citada aqui. Estes organismos utilizam dispositivos mecânicos, tais como hifas modificadas (armadilhas) e artifícios enzimáticos para superar as larvas de nematóides (produção de enzimas hidrolíticas, especialmente proteases). O fungo nematófago predador Arthrobotrys sinensis (SF53) produz três proteases com atividade nematicida quando cultivado em meio de cultura sólido. No entanto, o perfil proteolítico produzido por este fungo, quando cultivado em meio de cultura líquido permanece desconhecido. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de proteases do fungo nematófago A. sinensis em meio líquido e sua atividade nematicida sobre larvas de primeiro estágio (L1) de A. vasorum. As proteases foram obtidos na sua forma bruta, utilizando papel de filtro Whatman no.1, seguido por centrifugação durante 5 min a 10 x g e 4 °C. Um zimograma foi realizada com caseína co-polimerizada como substrato num gel de poliacrilamida. Um ensaio in vitro para avaliar a ação nematicida das proteases de A. sinensis (SF53) produzidas em meio líquido sobre as L1 de A. vasorum foi realizado. Pela análise do zimograma, observou-se um único halo no início da digestão do gel, o que sugere que as três proteases de SF53 são produzidas em um complexo enzimático de grande peso molecular. Em relação à atividade nematicida, dentro de 24 horas, as proteases produzidas em meio líquido por A. sinensis (SF53) apresentaram uma percentagem de redução de 64% no número de L1 de A. vasorum quando comparadas com o grupo controle. No presente trabalho, sugere-se que as três proteases de SF53 são produzidos em um complexo enzimático e também foi demonstrado que estas enzimas foram eficazes na destruição das L1 de A. vasorum. |