Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 4624
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, FUNARBE, Outros |
| Primeiro autor | Lorena Keller de Jesus Pereira |
| Orientador | MARIA CRISTINA BARACAT PEREIRA |
| Outros membros | ABELARDO SILVA JUNIOR, MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO, Marcos Jorge de Magalhães Júnior, Renato Lima Senra |
| Título | Análise fosfoproteômica de células MDBK infectadas com o herpesvírus bovino 1 nos estágios iniciais de infecção |
| Resumo | O Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) pertence à família Herpesviridae, sub-família Alphaherpesvirinae. O BoHV-1, disseminado na bovinocultura, acarreta prejuízos econômicos aos países criadores de gado. No ciclo lítico de infecção do herpesvírus, da entrada do vírus na célula até a saída da progênie, decorrem aproximadamente 16-20h. A expressão gênica ocorre de maneira ordenada, consistindo de immediate early gene (IEG), 2-4 horas pós infecção (hpi); early gene (EG), 5-7 hpi; e late gene (LG). De modo geral, as proteínas do BoHV-1 têm como alvo na célula hospedeira vias metabólicas essenciais para o sucesso da infecção produtiva e latente. O vírus ajusta o metabolismo dos ácidos nucléicos do hospedeiro à replicação, transcrição e tradução do genoma viral. Causa perturbações no mecanismo de silenciamento gênico, nos bloqueios epigenéticos, na sinalização cálcio-dependente, nos mecanismos de modificação pós-traducional, na produção de NF-κB (factor nuclear kappa B) e na apoptose. A fosforilação de proteínas é uma importante modificação pós-traducional envolvida na regulação de uma variedade de funções celulares. Já foram identificadas proteínas fosforiladas essenciais para a infecção do BoHV-1. Assim, o objetivo desse trabalho foi a avaliação do fosfoproteôma por eletroforese bidimensional, abrangendo a dinâmica do estado de infecção in vitro nas primeiras horas de infecção, afim de identificar vias metabólicas envolvidas ou afetadas pelo BoHV-1. Para realização dos ensaios in vitro, foram utilizadas células da linhagem de rim bovino Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cultivadas em meio mínimo essencial de Eagle (MEM) suplementado com 5% de soro fetal bovino. As Monocamadas de células semi-confluente foram infectadas com o BoHV-1. As dosagens de proteínas foram realizadas pelo método de Bradford. A isoeletrofocalização foi em equipamento IPGphor II (GE Healphcare), com tiras IPG de pH 3-10L, de 7 cm, com 120 µg de proteínas. A segunda dimensão foi por SDS-PAGE 12,5%T. Para revelar, dois tipos de corantes foram utilizados em cada gel: inicialmente, Pro-Q Diamond, específico para fosfoproteínas; após aquisição da imagem, os géis foram corados com Coomassie Brilliant Blue G-250, para detecção de proteínas totais. Após análise dos géis, as fosfoproteínas diferencialmente abundantes foram tripsinizadas e identificadas por MS1 e MS2. As fosfoproteínas identificadas aqui disponibilizarão informações a serem usadas na identificação de marcadores moleculares e alvos farmacológicos para o controle do BoHV-1. |
| Palavras-chave | herpesvírus bovino 1, infecção in vitro, análise fosfoproteômica |
| Forma de apresentação..... | Painel |