Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 4549
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Biologia e manejo de doenças e pragas de plantas |
| Setor | Departamento de Fitopatologia |
| Bolsa | CAPES |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES |
| Primeiro autor | Renato Lorenzon Villaschi |
| Orientador | EDUARDO SEITI GOMIDE MIZUBUTI |
| Outros membros | Ana Francisca Tibúrcia Amorim Ferreira e Ferreira, Braz Tavares da Hora Júnior |
| Título | Influência de métodos de extração de DNA na diversidade microbiana em Hevea brasiliensis |
| Resumo | Hevea brasiliensis, árvore endêmica da floresta amazônica brasileira, é a única espécie cultivada comercialmente para extração da borracha natural, commodity de alto valor. No Brasil, o principal fator limitante à produção de seringueiras nas regiões tropicais é a doença conhecida como Mal das Folhas da seringueira, causada pelo fungo Pseudocercospora ulei. Estudos com germoplasma de H. brasiliensis coletados ao longo das bacias dos rios Purus, Juruá e Madeira identificaram genótipos com resistência ao Mal das folhas, o que pode estar associado a micro-organismos endofíticos. Até o momento, os estudos que buscaram elucidar a diversidade presente em H. brasiliensis foram baseados apenas em métodos de cultivos. Tais métodos tem baixo poder informativo, pois estima-se que apenas 10% da diversidade microbiana pode ser acessada por eles. Uma abordagem metagenômica neste caso seria interessante, pois teríamos acesso a toda a diversidade presente nas plantas de seringueira. Neste caso, a extração de DNA metagenômico com bom rendimento e qualidade é essencial para o estudo. O objetivo do trabalho foi avaliar a eficiência de 3 diferentes métodos de extração de DNA na diversidade de H. brasiliensis. Amostras de caule, folha e raiz de seringueira foram coletadas ao longo das bacias hidrográficas dos rios Purus e Juruá (Acre e Amazonas), Madeira (Amazonas) e Tapajós (Pará). As amostras de caule e raiz foram submetidas ao teste com 3 repetições. Os métodos de extração testados foram PowerSoil® DNA Isolation Kit da MOBIO, NucleoSpin® soil da Macherey-Nagel e o método CTAB. O DNA extraído foi quantificado em gel de agarose 0,8% e em espectrofotômetro NanoDrop 2000, onde também avaliou-se a razão 260/280. O efeito dos métodos de extração de DNA sobre a diversidade de mircro-organismos foi avaliado por meio da amplificação do DNA com o par de primers 16S (F968- GC e R1401) e em seguida foi feito eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE). O método de extração que apresentou melhores resultados em termos de rendimento e qualidade do DNA foi o PowerSoil® DNA Isolation Kit da MOBIO. A diversidade representada no gel de DGGE apresentou padrões similares em todos os métodos, porém o kit da MOBIO foi o que teve o maior número e comprimento de fragmentos. Portanto, entre os métodos testados o kit da MOBIO é o mais indicado para avaliar a diversidade em H. brasiliensis. |
| Palavras-chave | metagenômica, endofíticos, seringueira |
| Forma de apresentação..... | Painel |