Resumo |
Neste trabalho foram estudados os fatores que poderiam influenciar a imobilização da enzima β-galactosidase em um criogel monolítico supermacroporoso para hidrólise da lactose. Foi utilizada a enzima β-galactosidase de Kluyveromyces lactis. Os criogéis foram produzidos pela co-polimerização dos monômeros acrilamida e N-metileno-bis-acrilamida, iniciada por persulfato de amônio e TEMED (N,N,N', N'-tetrametiletileno-diamino), dentro de uma coluna de plástico de 2 cm de altura e 8 mm de diâmetro, sob condições de temperatura de congelamento de -12 °C sendo usado como suporte para a imobilização da enzima a fim de promover um aumento na estabilidade da β-galactosidase no criogel. A atividade enzimática foi determinada em relação à concentração de glicose, produto da hidrólise da lactose, utilizando um kit Glicose Monoreagente (Glicose oxidase / peroxidase) e medindo a absorbância em 540 nm em espectrofotômetro. O teor de proteína imobilizada e também o teor de proteína livre foram determinadas pelo método do ácido biciconínico (BCA) por meio da leitura de absorbâncias em 562 nm. Utilizou-se de um delineamento de face centrada para verificar a influência dos parâmetros pH (6,5; 7,5; e 8,5), temperatura (4 °C, 14 °C e 24 °C) e concentração da enzima β-galactosidase (1,5 mg · ml-1; 3,0 mg · ml-1; e 4,5 mg · ml-1) no rendimento de imobilização da enzima e a atividade hidrolítica recuperada. Fez-se também a caracterização morfológica do criogel contendo as enzimas imobilizadas através da determinação da porosidade e de análises das micrografias obtidas em microscópio eletrônico de varredura. Os resultados obtidos foram submetidos a análise de variância (ANOVA). Os resultados indicaram que o efeito linear e quadrático do pH afetaram significativamente o rendimento de imobilização ao nível de 5% de probabilidade pelo Teste F porém apresentou falta de ajuste significativa e um baixo valor de coeficiente de determinação R² = 0,521. O modelo para a atividade recuperada não foi significativo ao nível de 5% de probabilidade. Contudo, são necessários experimentos adicionais a fim de se obter maiores valores de atividade enzimática recuperada após o processo de imobilização e um modelo estatístico com elevado valor de coeficiente de determinação (R²). |