Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 4249
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Microbiologia |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Everaldo da Silva Cruz |
| Orientador | MARIA CATARINA MEGUMI KASUYA |
| Outros membros | Alexandre Patrocínio de Almeida, Jamille Steffany Colatino de Souza, Melissa Faust Bocayuva Cunha, Tomás Gomes Reis Veloso |
| Título | Otimização de métodos de conservação e extração de DNA de amostras radiculares de orquídeas colonizadas com fungo micorrízico |
| Resumo | A conservação de espécies de orquídeas ameaçadas de extinção requer a presença de um fungo micorrízico compatível para germinação de suas sementes in situ, uma vez que essas não possuem reserva de carbono suficiente. Metodologias baseadas em biologia molecular têm sido utilizadas para verificar qual(is) o(s) parceiro(s) fúngico(s) se associam com cada espécie de orquídea. Estas metodologias têm dois processos em comum na sua primeira etapa: preservação e extração de DNA das amostras radiculares. É essencial que os métodos de conservação e extração proporcionem rendimento e integridade de DNA adequados para que que haja acesso a toda informação genética presente nestas amostras. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi otimizar o processo de extração de DNA com o kit DNA NucleoSpin® Soil (Macherey-Nagel) e selecionar o melhor método de conservação de DNA de raízes colonizadas de orquídeas. Foram realizados dois experimentos. O experimento 1 visou otimizar o processo de extração de DNA. Foram avaliados 5 níveis de frequência angular (4000, 4400, 5300, 6100 e 6500 rpm) e 5 níveis de tempo (6, 18, 48, 78 e 90s) no equipamento Precellys®24, configurando-se um planejamento do tipo Delineamento do Composto Central Rotacional (DCCR), com 4 ensaios nos pontos axiais (+√2 e -√2) , 4 ensaios nos pontos cúbicos (+1 e -1) e 3 ensaios no ponto central (0, 0), totalizando 11 ensaios. No experimento 2 foram testados três métodos de conservação de DNA: RNAlaterTM (23 °C), tampão de extração (SL1, 23 °C) e refrigeração (-20 °C) durante 3 dias. Em ambos os experimentos o DNA extraído foi quantificado por NanoDrop® (Thermoscientific) e a integridade verificada em gel de agarose (0,8 %). Pela análise dos dados do experimento 1 foi ajustada a seguinte equação: Y = 0.89* + 0.001667*a + 0.2192b – 0.002267*b2, onde Y = quantidade de DNA extraída, a = frequência angular e b = tempo. Sendo assim, o ponto de otimização corresponde à combinação de 6500 rpm e 48 s, que também proporciona integridade adequada de DNA. No experimento 2 verificou-se que o método de conservação que proporciona maior quantidade e integridade de DNA após 3 dias é o tampão de lise (SL1) do kit de extração utilizado. Portanto, conclui-se que o método de conservação mais adequado para raízes de orquídeas é o acondiocionamento no tampão de lise do kit e a extração de DNA deve ser realizada utilizando-se a combinação de 6500 rpm e 48 s no equipamento Precellys®24. |
| Palavras-chave | micorrízico, DNA, orquídeas |
| Forma de apresentação..... | Painel |