Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 4248
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | PROBIC/FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Lyvia Lopes Miranda |
| Orientador | LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA |
| Outros membros | Christiane Eliza Motta Duarte, EDUARDO DE ALMEIDA MARQUES DA SILVA, SERGIO OLIVEIRA DE PAULA, SILVIA ALMEIDA CARDOSO |
| Título | Sequenciamento e clonagem da lectina isolada de Brassica oleracea var. Botrytis |
| Resumo | Esta pesquisa é parte do projeto “Efeitos imunoestimulatórios da lectina isolada de Brassica oleracea var. Botrytis sobre neutrófilos". As lectinas são proteínas que se ligam especificamente e reversivelmente a carboidratos. Essas proteínas estão envolvidas em diversos fenômenos biológicos como endocitose, regulação de migração, adesão celular, fagocitose e no processo de invasão por patógenos, entre outras funções. Recentemente uma nova lectina isolada de Brassica oleracea var. Botrytis, denominada BOL, foi identificada por nosso grupo de pesquisa, essa lectina foi caracterizada bioquimicamente como uma proteína não glicosilada, de massa molecular 34 kDa, termoestável até 60 ºC e atividade ótima em pH 7 e 8. Além disso, essa proteína possui especificidade de ligação a carboidratos complexos como fetuína e asialofetuína. O objetivo do presente estudo foi obter a seqüência completa e clonar a lectina BOL, para que de posse da proteína recombinante possamos avaliar os efeitos imunoestimulatórios dessa lectina sobre neutrófilos. A lectina foi purificada em coluna de afinidade com fetuína e eluida com 1M de NaCl, submetida a sequenciamento do N-terminal em sequenciador de proteína modelo PPSQ 33A, onde obtivemos a seqüência ETRAFREERPSSKIVTIAG. A partir da sequencia do N-terminal fomos capazes de desenhar o primer degenerados 5'-garacncgngcntty-3'. Para obtenção da seqüência completa da proteína colocamos sementes de B. oleraceae var. Botrytis para germinar em meio Murashige e Skoog e extraímos os mRNAs usando o reagente Trizol. O cDNA foi sintetizado utilizando o M-MLV de transcriptase reversa a partir do RNA total. O cDNA foi usado na reação de PCR utilizando o primer degenerado. Das nove combinações de primers, cinco resultaram num amplicon de aproximadamente 800-900 pb, que foi isolado, clonado no vetor pGEM-T Easy e enviado para sequenciamento. As sequências obtidas foram alinhadas para produzir uma única sequência que foi utilizada para pesquisar os homólogos. A análise por BLAST revelou uma alta identidade com a proteína TRAF-like Arabidopsis thaliana. Este é um estudo preliminar, na fase seguinte, a proteína recombinante será sintetizada. Estes resultados proporcionam a base para estudos posteriores detalhados sobre a estrutura e função desta lectina. |
| Palavras-chave | Brassica oleracea, lectina, sequenciamento. |
| Forma de apresentação..... | Painel |