Resumo |
Actinobacillus pleuropneumoniae é o agente causador da pleuropneumonia suína, uma doença contagiosa e severa de grande importância na suinocultura e responsável por grandes prejuízos econômicos. O agravamento da dispersão da pleuropneumonia está diretamente relacionado ao uso indiscriminado de antibióticos e aos mecanismos de transferência horizontal de genes com consequente disseminação de DNAs plasmidiais, os quais podem conter genes que conferem resistência aos agentes antimicrobianos comumente utilizados em campo. O estudo destes elementos genéticos em isolados clínicos pode contribuir de forma significativa na melhor compreensão dos mecanismos de dispersão de resistência nas fazendas produtoras e, desta forma, elaborar estratégias mais eficazes de controle da doença. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar plasmídeos carreadores de genes de resistência em isolados clínicos de Actinobacillus pleuropneumoniae sorotipo 8 obtidos no Estado de Minas Gerais. Seis genomas, correspondentes aos isolados MV460, MV518, MV597, MV780, MV1022 e MV5651 foram analisados quanto à presença de genes de resistência e de sequências similares a plasmídeos previamente depositados no banco de dados Genbank (NCBI). Nos perfis de resistência apresentados pelos isolados foram encontrados genes de resistência à tetraciclina, florfenicol, estreptomicina e sulfonamida. Destes isolados clínicos, MV518 e MV780 apresentaram diferentes perfis de genes de resistência e foram selecionados. Seus respectivos plasmídeos, denominados p518 e p780, foram extraídos por lise alcalina, purificados, amplificados por PCR inverso com oligonucleotídeos específicos e submetidos ao sequenciamento, além de serem analisados por testes de conjugação e transformação bacteriana. As sequências plasmidiais obtidas foram analisadas e o plasmídeo p780 (5129 pb) apresentou 99% de identidade com a sequência de pB1001, que foi isolado de Pasteurella multocida na Espanha, mostrando que possivelmente trata-se do mesmo plasmídeo e que foi adquirido por A. pleuropneumoniae por transferência horizontal de genes. O plasmídeo p518 (3937 pb) apresentou uma sequência inédita e é, em nosso conhecimento, um dos menores plasmídeos já encontrados em A. pleuropneumoniae, apresentando considerável similaridade com outros plasmídeos da família Pasteurellaceae e outras espécies bacterianas de outras famílias. Este trabalho descreve o repertório de genes de resistência encontrados em isolados clínicos de A. pleuropneumoniae encontrados em Minas Gerais e representa um avanço no entendimento do processo de dispersão de resistência a antimicrobianos na região estudada. |