Resumo |
O uso indiscriminado de agentes antimicrobianos, como os antibióticos, tem selecionado nos últimos anos bactérias resistentes a diferentes drogas. Esta resistência leva a prejuízos econômicos na pecuária leiteira como, gastos com tratamento, aumento do intervalo entre partos, diminuição do valor genético do rebanho e descarte de animais. Neste contexto, Trueperella pyogenes, uma bactéria Gram-positiva, oportunista, com diversos fatores de virulência, encontra-se associada a enfermidades como mastite e metrite em vacas leiteiras. Desta forma, a fagoterapia surge como uma alternativa natural, não tóxica e economicamente viável no combate a diversos procariotos patogênicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade lítica bem como a capacidade de prevenção da formação de biofilme de três bacteriófagos isolados e caracterizados, específicos para T. pyogenes, sendo eles denominados vB_TpyM-UFV13, vB_TpyP-UFV21 e vB_TpyM-UFV26, de acordo com a nova nomenclatura proposta para vírus de Bacteria e Archaea. Para avaliação dos bacteriófagos na densidade populacional e redução do biofilme foram utilizados 20 µL de cultura bacteriana em D.O600 igual a 0,1 (108 UFC/ml), 160 µL de caldo BHI e diferentes diluições de bacteriófagos, equivalente aos MOI’s de 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001 e 0,00001 em microplacas de poliestireno de 96 poços de fundo chato. Os controles negativo e positivo foram caldo BHI apenas e caldo BHI com cultura bacteriana, respectivamente. A placa foi incubada por 24 horas a 37°C, em seguida medida a absorvância a 600 nm e adicionado cristal violeta (CV) 0,1% (m/v). A Absorvância do controle positivo foi normalizada para 100% visando-se estabelecer a massa relativa do biofilme. As análises de variância (ANOVA) foram feitas para todas as amostras utilizando-se o programa GraphPad Prism versão 5, e os grupos comparados pelo teste de Bonferroni com α = 0,05. Com exceção do fago vB_TpyM-UFV13, que não apresentou atividade na redução da biomassa pelo método de coloração por CV para T. pyogenes 3933, todos os três bacteriófagos apresentaram efeitos tanto na redução da densidade populacional quanto na formação de biofilme. Estes resultados abrem perspectiva para o sequenciamento dos genomas, testes farmacocinéticos e estabelecimento de um protocolo de tratamento que utilize estes bacteriófagos no controle de enfermidades que acometem vacas de leite como mastite e metrite. |