Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 4040
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Genética e melhoramento vegetal |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | PROBIC/FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, FUNARBE |
| Primeiro autor | Gabriella Macedo Mascarenhas Diniz |
| Orientador | CARLOS ROBERTO DE CARVALHO |
| Título | Metodologia de extração nuclear de folhas de Eucalyptus ssp. para quantificação genômica, por citometria de fluxo, visando prospecção de populações de Empresas Florestais |
| Resumo | O gênero Eucalyptus se destaca por seu grande valor econômico e ambiental em virtude de sua capacidade de adaptação a diversas condições de clima e rápido crescimento. Considerando sua importância, várias técnicas de biotecnologia têm sido aplicadas para gerar informações quanto ao conteúdo de DNA que podem ser utilizadas em programas de melhoramento vegetal. A Citometria de Fluxo (CF) é uma técnica de grande auxílio na prospecção rápida e precoce de grande número de plantas. Para essa técnica ter eficiência e precisão, o protocolo deve possibilitar a obtenção de núcleos isolados, viáveis e em condições de coloração estequiométrica adequada com fluorocromos específicos. Considerando as características particulares de cada planta, os procedimentos de obtenção da suspensão nuclear para CF devem ser adequados individualmente. As folhas de Eucalyptus spp. possuem grande quantidade de compostos secundários que oxidam rapidamente a amostra e dificultam a obtenção de resultados satisfatórios em análises citométricas. O presente projeto teve como objetivo geral o desenvolvimento e a padronização de uma metodologia de CF visando a extração nuclear otimizada a partir de folhas de Eucalyptus spp. As plantas de eucalipto usadas no experimento foram cultivadas em casa de vegetação na Universidade Federal de Viçosa. Fragmentos de 2cm2 de folhas jovens foram fragmentadas in placas de petri contendo tampão OTTO I, suplementado com DTT 2mM e 0,5% DMSO. Foi avaliada a adição e variação de concentrações de polietilenoglicano (PEG) e Dimetilsulfóxido (DMSO) ao tampão OTTO I. Foram realizados 13 testes e os tratamentos foram determinados de modo que A corresponde a 0,5% de DMSO, B 1% de PEG, C 2% de PEG, D 3% de PEG, E 3% de PEG e 0,5 DMSO, F 4% de PEG, G 5% de PEG, H 6% de PEG, I 6% de PEG e 0,5%, J 7% de PEG, K 7% de PEG e 0,5% de DMSO, L 8% de PEG, M 8% de PEG e 0,5 de DMSO, sendo P referente ao tratamento controle. Ao final, 1,5µl da solução de coloração OTTO II suplementada com 15µM DAPI e 2mM DTT foi adicionado, sendo deixado no escuro por 20 minutos para corar. Foi identificado o tratamento que se mostrou a solução mais adequada, pela análise dos coeficientes de variação (CV) gerados pela avaliação dos histogramas. Os procedimentos padrões de extração e coloração de núcleos para citometria de fluxo propostos por Otto (1990) e modificado por Doležel e Göhde (1995) não obtiveram CV menor que 5%, o tampão OTTO I modificado pela adição PEG e DMSO demonstrou uma diminuição do valor do CV até a concentração de 7% de PEG e 0.5% de DMSO que resultou quantidade suficiente de núcleos intactos e isolados com CV 4,62%. Em conclusão, dentre os tratamentos o tampão OTTO I descrito por Otto (1990) Doležel e Göhde, (1995) com adição de 0.5 % de DMSO e 7% de PEG se mostrou o mais adequado para o isolamento de núcleos para eucalipto. |
| Palavras-chave | Citometria, Suspensão Nuclear, Eucalipto |
| Forma de apresentação..... | Painel |