Conexão de Saberes e Mundialização
19 a 24 de outubro de 2015
Trabalho 4011
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Pós-graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | CAPES |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES |
| Primeiro autor | Patrick Fernandes da Silva |
| Orientador | LEANDRO LICURSI DE OLIVEIRA |
| Outros membros | ARTUR KANADANI CAMPOS, JACKSON VICTOR DE ARAUJO, Marisa Caixeta Valadão, Wendeo Ferreira da Silveira |
| Título | Atividade larvicida do extrato bruto enzimático enzimático do fungo Duddingtonia flagras sobre larvas de Panagrellus spp. |
| Resumo | Fungos nematófagos são usados no controle biológico de helmintos gastrintestinais de humanos e animais domésticos, quando peletizado em alginato de sódio. Busca-se atualmente uma nova abordagem para utilização desses fungos através de enzimas hidrolíticas presentes no extrato bruto que possam ter atividade no controle das verminoses gastrintestinais. Este trabalho tem como objetivo avaliar atividade de proteases do extrato bruto enzimático (EBE) de Duddingtonia flagrans (AC001) contra larvas de Panagrellus spp. O EBE foi obtido por transferência de discos de cultura (CMA 2%) contendo micélio fungico para fracos erlenmyers, com volume totalizando 50 mL de meio líquido, formado por: NaCl, MgSO4, K2HPO4 (0,3g/l respectivamente), extrato de levedura (0,2g/l) e caseina 1%. Este meio foi incubado em shaker a 120 rpm, 28°C por 8 dias. Ao final o meio líquido foi centrifugado por 10 min a 10.000rpm em centrifuga refrigerada, coletou-se o sobrenadante e então ele foi concentrado em sistema Amicon® Ultra Centrifugal Filters e dialisado. Os valores usados para medir a atividade enzimática foram: 100 µl de extrato bruto de AC001; 500 µl de caseína 1% e 4000µl Tris-HCl 50mM, pH7,4. Os reagentes foram misturados e incubados por 25 min a 43ºC. A reação foi interrompida com TCA20%. O material foi centrifugado a 10.000g por 10 min, o sobrenadante foi coletado e analisado no espectrofotômetro a 440nm. Uma curva padrão foi construída utilizando várias concentrações de tirosina. Uma unidade de protease foi definida como a quantidade de enzima necessária para liberar 1mg de tirosina por minuto. Dois grupos (tratado e controle) com 10 repetições foram formados em placas de 96 poços. No grupo tratado foram adicionados 50μl (58 larvas de Panagrellus spp.) e 150μl de extrato bruto enzimático de AC001. Controle continha o mesmo número de larvas de Panagrellus spp. e 150μ de água destilada. Os tubos foram incubados em BOD a 26°C e analisados quanto mortalidade e motilidade, 12 e 24h após incubação. Com 12 horas de exposição ao EBE, 30% das larvas de Panagrellus spp. apresentaram baixa motilidade e percentual de redução de 11% quando comparado ao grupo controle. No tempo de 24 horas a maior parte das larvas apresentaram baixa motilidade (70%) e o percentual de redução chegou a 31% quando comparado ao grupo controle. O extrato bruto enzimático de AC001 foi eficaz na redução da motilidade e capaz de reduzir significativamente o número de larvas de Panagrellus spp. Estes resultados incentivam novos estudos para melhorar e comprovar aplicabilidades biotecnológicas de EBE de fungos nematófagos no controle de helmintos. |
| Palavras-chave | protease, fungo nematófago, controle biológico |
| Forma de apresentação..... | Painel |