Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 3201
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Farmacologia e bioquímica |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Isadora Cunha Ribeiro |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | Christiane Mariotini Moura, GUSTAVO COSTA BRESSAN, MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO |
| Título | Busca por Inibidores da NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi Como Estratégia no Desenho Racional de Novas Drogas para o Tratamento da Doença de Chagas. |
| Resumo | A Doença de Chagas é causada pelo Trypanosoma cruzi, um protozoário flagelado da ordem Kinetoplastida. Essa doença ainda permanece como um grave problema de saúde pública, com uma incidência anual de 700.000 a 800.000 novos casos. O T. cruzi possui em sua superfície uma ectonucleotidase denominada NTPDase-1. As ectonucleotidases da família E-NTPDases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados, que podem ser degradados a nucleosídeos por outras ectonucleotidases. Os nucleotídeos extracelulares atuam como sinalizadores em vários processos celulares, como modulação da resposta imune de hospedeiros mamíferos. A hidrólise de ATP extracelular possui papel na infectividade e virulência do T. cruzi, bem como para outros parasitos, como Leishmania, Trichomonas, Toxoplasma, Entamoeba e outros. Por isso, as NTPDases são consideradas um alvo em potencial para o desenho racional de novas drogas para uso no tratamento da doença de Chagas. Este trabalho teve como objetivo a buscar por inibidores da TcNTPDase-1. Para isso, avaliamos a atividade nucleotidásica da proteína. Buscou-se também, a padronização e expressão da NTPDase-1 na sua forma nativa, para aprimoramento dos estudos estruturais. A atividade enzimática foi medida pela dosagem de ortofosfato livre através do método colorimétrico do Verde Malaquita. Para realização desta etapa, utilizamos a proteína recombinante purificada a partir de corpos de inclusão. Os compostos selecionados para os ensaios de inibição estavam classificados em três grupos: compostos análogos, extratos vegetais e compostos sintéticos. Para a padronização da expressão da TcNTPDase-1 em sua forma nativa foram feitos testes de indução, onde variou-se a temperatura, tempo e meio de cultivo. A purificação foi feita em três etapas cromatográficas, afinidade – troca iônica – afinidade, em FPLC. Utilizou-se SDS-PAGE para a avaliação da expressão e purificação da proteína de interesse. A partir dos dados das atividades enzimáticas da TcNTPDase-1, identificou-se dois compostos com inibição competitiva de 93% e 73% dentre os análogos de adenina. Entre os extratos vegetais também obteve-se compostos com atividade inibitória, sendo dois com inibição total; os compostos isolados desses extratos foram testados. Os ensaios de inibição com os compostos sintéticos estão em andamento, pretende-se determinar o tipo de inibição e o IC50 dos inibidores em potencial, assim com a realização de experimentos com os parasitos para avaliar os efeitos dos inibidores selecionados na atividade enzimática da TcNTPDase-1. A expressão da TcNTPDase-1em fração solúvel foi possível a baixa temperatura (20 oC) e em meio mais pobre (meio LB), as etapas cromatográficas utilizadas foram capazes de recuperar a proteína alvo com um alto grau de pureza, porém é necessário a confirmação da purificação com a realização de Western blot. |
| Palavras-chave | NTPDase, Inibidores, Trypanosoma cruzi |
| Forma de apresentação..... | Painel |