Resumo |
Os equinos são animais poliestrais sazonais, sendo que a atividade reprodutiva é primariamente regulada pelo foto-período. O reflexo dessa sazonalidade sobre os gametas masculinos é demonstrado nas diferenças estruturais e integridade funcional da membrana plasmática dos espermatozoides. As diferenças circanuais afetam a composição e o conteúdo hormonal do plasma seminal, e alguns fatores presentes no plasma seminal interagem com a superfície dos espermatozoides, modificando as características de sua membrana, e um desses componentes são as proteínas. As proteínas do plasma seminal têm sido apresentadas como responsáveis por algumas etapas do processo de fertilização, como o estabelecimento das reservas espermáticas no oviduto, a modulação da capacitação e a interação entre gametas. A proteômica do plasma seminal dos garanhões, portanto, por meio de eletroforese bidimensional (2-DE), poderia apontar fatores a ser empregados como marcadores bioquímicos para a predição da fertilidade e qualidade do sêmen. O objetivo desse trabalho foi avaliar o proteoma total do sêmen de três garanhões em idade reprodutiva, coletados em diferentes épocas do ano, visando avaliar o efeito da sazonalidade na reprodução desses animais. As colheitas de sêmen foram realizadas em intervalos de quinze dias, durante o período de um ano, totalizando 26 coletas por animal. Ao final das avaliações físicas do sêmen e a retirada das amostras para os exames complementares, os espermatozoides foram separados do plasma seminal por centrifugação. As amostras de plasma então foram submetidas à separação por 2-DE de acordo com a estação bioclimática em que foram coletadas, sendo analisadas de acordo com os garanhões. As proteínas foram separadas quanto ao seu ponto isoelétrico, em sistema Ettan IPGphor 3 em fitas de 24 cm e gradiente de pH entre 3 e 10. Os géis foram digitalizados e analisados para identificar spots diferentemente presentes, com potencial para marcadores biológicos. Em nosso trabalho de IC, os spots de cada proteína diferencialmente expressa estão sendo manualmente localizados, excisados, as proteínas reduzidas, alquiladas e proteolisadas. As amostras estão sendo analisadas em espectrômetro de massas MALDI-TOF/TOF (Ultraflex III - Bruker Daltonics, do NuBioMol/UFV), por MS e MS/MS. Como resultado, encontrou-se um conjunto de proteínas diferencialmente expressas nas diferentes estações do ano, relacionadas à sazonalidade, que estão em processo de identificação, visando localizar marcadores moleculares ou situações fisiológicas que evidenciem procedimentos para a melhora do processo de reprodução de equinos. Apoio: FAPEMIG, CNPq, FINEP e CAPES. |