Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 3050
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Biologia Geral |
| Bolsa | PROBIC/FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | FAPEMIG |
| Primeiro autor | Jonas da Silva Teixeira |
| Orientador | SERGIO OLIVEIRA DE PAULA |
| Outros membros | Roberto Sousa Dias, Vinicius da Silva Duarte |
| Título | Caracterizações morfológica e molecular de três bacteriófagos específicos para Trueperella pyogenes. |
| Resumo | O uso indiscriminado de agentes antimicrobianos, como os antibióticos, tem selecionado nos últimos anos bactérias resistentes a diferentes drogas. Esta resistência leva a prejuízos econômicos na pecuária leiteira como, gastos com tratamento, aumento do intervalo entre partos, diminuição do valor genético do rebanho e descarte de animais. Neste contexto, T. pyogenes, uma bactéria Gram-positiva, oportunista, com diversos fatores de virulência, encontra-se associada a enfermidades como mastite e metrite em vacas leiteiras. Desta forma, a fagoterapia surge como uma alternativa natural, não tóxica e economicamente viável no combate a diversos procariotos patogênicos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar três vírus bacterianos que possuem atividade contra T. pyogenes capaz de formar biofilme. A caracterização morfológica foi realizada com o uso do microscópio eletrônico de transmissão, onde uma alíquota de 10 μL do purificado viral foi aplicada sobre uma tela apropriada e contrastada com acetato de uranila 0,5% e analisados em um aumento de 140.000 vezes. Para se obter o perfil proteico, as proteínas virais foram precipitadas com ácido tricloroacético (10% v/v), seguido de três lavagens com acetona (11.753 g por 10 minutos), ressuspendido em água deionizada e quantificado pelo método que utiliza o ácido biciconínico (BCA) como formulação, com padronização de 20 µg de precipitado por poço. A corrida foi realizada em gel de poliacrilamida 12,5%, voltagem de 190 V, com posterior coloração por prata. Por fim, foi gerado um padrão polimórfico, próprio para cada fago, a partir dos oligonucleotídeos iniciadores OPL5 (5’-ACGCAGGCAC-3’) e P1 (5’-CCGCAGCCAA-3’). A análise morfológica permitiu a caracterização dos três bacteriófagos como pertencentes à ordem Caudovirales, dois deles inseridos na família Myoviridae (cauda contrátil, morfotipos A1) e o outro pertencente à família Podoviridae (cauda não contrátil, morfotipo C1). O SDS-PAGE revelou haver pelo menos sete proteínas comuns aos três fagos (123 kDa, 117 kDa, 114 kDa, 65 kDa, 64 kDa, 41 kDa e 38 kDa), porém o perfil foi único para cada vírus. Finalmente, o RAPD-PCR foi útil na diferenciação dos vírus pertencentes a mesma família, o que ratificou suas diferenças. A caracterização viral é o primeiro passo para utilização dos mesmos em uma terapia, abrindo perspectiva para o sequenciamento de seus genomas, testes farmacocinéticos e estabelecimento de um protocolo de tratamento que utiliza bacteriófagos no controle de enfermidades que acometem vacas de leite como mastite e metrite. |
| Palavras-chave | Bacteriófago, Trueperella pyogenes, fagoterapia |
| Forma de apresentação..... | Painel |