Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2949
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | TIAGO JAQUEL ZILCH |
| Orientador | MARCIA ROGERIA DE ALMEIDA LAMEGO |
| Outros membros | ABELARDO SILVA JUNIOR, Jackson de Andrade Teixeira, JULIANA LOPES RANGEL FIETTO, Thiago Souza Onofre |
| Título | Análise de expressão de proteína recombinante em sistema bacteriano com relação à presença ou ausência do uso de antibiótico. |
| Resumo | A produção de proteínas recombinantes para fins medicinais, agrários e pecuários, entre outros, tem se mostrado bastante eficaz, tanto no avanço tecnológico como economicamente. Para esta produção são utilizados sistemas de expressão, que variam de acordo com a proteína de interesse. O sistema mais comumente utilizado é o sistema bacteriano, por suas facilidades e por suas variadas escolhas no controle da expressão, variando de acordo com cada tipo de plasmídeo. Dentre outras diferenças, existem variados marcadores, como por exemplo, genes que conferem resistência a antibióticos, podendo assim ser testados quanto à eficiência na clonagem, crescimento celular e expressão da proteína. Os passos para a expressão de proteínas recombinantes, basicamente são: obtenção do gene de interesse (DNA), escolha do sistema de expressão adequado, clonagem e expressão propriamente dita. O presente trabalho trata-se da expressão de uma proteína recombinante do capsídeo viral do Circovírus suíno 2, que se encontra patenteada sob o número PI1020130018. Neste trabalho foi proposto avaliar a interferência da presença ou ausência de antibióticos para o controle de crescimento celular, diretamente relacionado à eficácia na expressão total da proteína recombinante de interesse. Após a clonagem, o pré-inoculo foi deixado overnight a 37°C e 180 rpm na presença de antibiótico a fim de eliminar as células não clonadas. Em seguida, o pré-inóculo foi adicionado a 1 litro de meio Terrific Broth e separados em duas amostras de 500 mL cada, uma contendo antibiótico e outra não. Ambas foram deixadas nas mesmas condições anteriores, até que a densidade óptica (DO600) atingisse valores entre 0,6 e 0,7, então adicionou-se IPTG como indutor e as células foram deixadas durante 4 horas a 30°C e 180rpm. Depois de atingido o tempo, as células induzidas foram centrifugadas e lisadas com tampão bicarbonato, para extração da fração solúvel, fração onde se encontra a proteína de interesse. Esta fração foi deixada sob agitação com um carboidrato de alto peso molecular para a purificação parcial da proteína recombinante de interesse. Assim, após todos os passos realizados, foi feita análise em gel SDS-PAGE 15% e alíquotas da proteína parcialmente purificada foram quantificadas pelo método de Bradford. Concluiu-se com base nos resultados que não houve diferença na quantidade de proteína recombinante expressa, e o presente trabalho servirá como apoio para futuros testes no processo de escalonamento da produção desta proteína, tendo em vista que este resultado deu-se em escala laboratorial. |
| Palavras-chave | expressão de proteínas recombinantes, circovirus suíno 2, proteínas recombinantes |
| Forma de apresentação..... | Painel |