Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2853
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Elói Quintas Gonçalves da Silva |
| Orientador | Maria Cristina Baracat-Pereira |
| Outros membros | Marcos Jorge Magalhães Júnior, Patrícia Dias Games |
| Título | Identificação de uma heveína de folhas de pimentão (Capsicum annuum L.) |
| Resumo | Peptídeos antimicrobianos caracterizam-se no geral por apresentarem massa menor que 10 kDa, serem ricos em resíduos de cisteínas, podendo apresentar ação antimicrobiana, contra bactérias, fungos, vírus e protozoários. Em plantas, já são reconhecidos por seu papel na defesa constitutiva e induzida. O pimentão é um fruto largamente produzido pela agricultura nacional, apresentando variedades resistentes a doenças, como a variedade comercial `Magali R', na qual peptídeos antimicrobianos podem estar relacionados a esta resistência. Além disso, o pimentão já é reconhecido por órgãos governamentais como um dos alimentos que mais se emprega a utilização de produtos químicos durante seu cultivo e armazenamento, portanto é de extrema importância o conhecimento da identidade dos peptídeos que têm potencial para substituir estes produtos. O objetivo deste trabalho é purificar e identificar uma heveína em um extrato solúvel fracionado 1- 10 kDa de folhas de pimentão `Magali R'. A fração enriquecida em peptídeos foi separada por cromatografia de fase reversa em resina C18 (0,46 x 15 cm, 5,0 μm) Shim-pack CLC-ODS (Shimadzu, Japão) em equipamento HPLC semi-preparativo (Waters Corporation). Após a coluna ser equilibrada com solução de ácido trifluoroacético (TFA) 0,1% a eluição se deu em gradiente descontínuo crescente da solução TFA 0,1% e acetonitrila 80%, a 1,0 mL min-1. Foram coletadas frações correspondentes a picos no perfil cromatográfico pela absorvância a 214 e 280 nm. Os picos selecionados seguiram para a cromatografia de exclusão molecular em coluna analítica (7,8 x 30 cm, 5,0 μm) Protein Pack 60 Å (Waters Corporation), em HPLC, com faixa de separação de 2 a 10 kDa, equilibrada e eluída em tampão Tris-HCl 25 mM, pH 7,0, acrescido de NaCl 250 mM, a 0,1 mL min-1. As amostras coletadas seguiram para análises em espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF/TOF, em equipamento Ultraflex III (Bruker Daltonics), usando matriz ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico em placa de aço MTP Anchor Chip TM 600/384 TF (Bruker Daltonics). Ao final das etapas cromatográficas, verificou-se a identidade do peptídeo no pico obtido com o maior tempo de retenção, sendo este encontrado com alto grau de pureza. As frações puras do peptídeo serão utilizadas para avaliar a potencialidade do agente antimicrobiano deste peptídeo e para sua caracterização estrutural, definindo-se assim uma metodologia economicamente viável para a produção biotecnológica desse peptídeo. |
| Palavras-chave | Pimentão, heveína, peptídeo antimicrobiano. |
| Forma de apresentação..... | Painel |