Resumo |
A transformação genética vem tornando-se uma ferramenta essencial para a adição de novas características em programas de melhoramento genético da cana-de-açúcar. A embriogênese somática e a organogênese são as vias de regeneração preferenciais para a obtenção de plantas transgênicas a partir de uma única célula transformada. O objetivo deste estudo foi estabelecer protocolos de regeneração in vitro, via embriogênese somática e organogênese, da variedade de cana-de-açúcar RB867515, uma das mais cultivadas no país, para utilização na transformação genética. Para avaliar o efeito dos reguladores de crescimento na embriogênese somática, segmentos meristemáticos (0,5 cm) de plântulas jovens mantidas em condições in vitro foram inoculados em meio MS suplementado independentemente com três reguladores de crescimento (2,4-D, Dicamba, e CPA) em quatro concentrações diferentes (5; 10; 15 e 20 µM). Após 30 dias, maior porcentagem de calos embriogênicos (36,95%) foi obtida com a dose de 20 µM de 2,4-D. Os calos embriogênicos foram transferidos para meio com baixa concentração de 2,4-D (2,26 µM) para obtenção de embriões globulares. Os embriões globulares foram transferidos para o meio de multiplicação composto do mesmo meio de indução acrescido de diferentes doses de AIA (28; 57; e 114 µM), sendo que a taxa de multiplicação significativamente maior ocorreu na dose de 114 µM. Após 30 dias, a maturação e conversão dos embriões somáticos foram testadas em meio de cultura MS usando sacarose ou manitol como reguladores osmóticos nas concentrações de 30, 60 e 90 gL-1 e Ácido Abscísico (ABA) em duas concentrações, 0 e 5 µM. Houve diferença significativa somente entre os reguladores osmóticos, e embriões somáticos maduros foram obtidos com 30 gL-1 de sacarose e 5 µM de ABA. Na organogênese direta foi testado o efeito do pré-tratamento de ápices caulinares com meio MS suplementado com 30 g/L de sacarose, 2,5 g de Phytagel e TDZ (2; 9 e 27 µM) por quinze dias. Os ápices caulinares foram posteriormente cultivados em meio de regeneração MS com 16 combinações de BAP (0 e 9 µM), ANA (0 e 5 µM) e TDZ (0; 2; 9 e 27 µM). A produção de brotações foi significativamente menor com os pré-tratamentos com TDZ. No entanto, nos tratamentos em meio de regeneração, a presença do TDZ teve efeito positivo na porcentagem de regeneração e número de brotos. Os meios contendo TDZ nas três concentrações em presença de BAP e/ou ANA não diferiram significativamente para a porcentagem regeneração que foi acima de 75%. O número de brotos por explante foi significativamente maior nos meios contendo TDZ (2µM) + BAP (0) + ANA (5µM) e TDZ (27µM) + BAP (9µM) + ANA (5µM) que produziram mais de 14 brotos/explante. No entanto, a adição de TDZ reduziu a altura das brotações nas concentrações mais elevadas. |