Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2786
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Clínica e cirurgia animal |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Bolsa | Jovens Talentos/CAPES |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq |
| Primeiro autor | Barbara Costa Fernandes |
| Orientador | EMILY CORRENA CARLO REIS |
| Outros membros | ANDREA PACHECO BATISTA BORGES, Fabrício Luciani Valente, Renato Barros Eleotério, Rodrigo Viana Sepúlveda |
| Título | Desenvolvimento e obtenção de células-tronco de medula óssea de coelhos e análise de seu cultivo in vitro para terapia celular |
| Resumo | A medicina regenerativa é uma promissora área de pesquisa médica e veterinária que utiliza células e biomateriais para regeneração de tecidos ou órgãos por lesões traumáticas ou degenerativas, objetivando restaurar a função perdida. Parte importante é a terapia celular com células-tronco devido aos bons resultados obtidos e vasta área de atuação. A primeira etapa para o sucesso da terapia celular é a obtenção das células e seu cultivo in vitro para expansão do número de células, além dos trabalhos de caracterização para posterior implantação in vivo. Sendo assim, o presente trabalho buscou estabelecer a metodologia para obtenção e cultivo das células-tronco mesenquimais da medula óssea de coelhos, parâmetros essenciais para o sucesso de futuros estudos utilizando coelhos como modelo experimental para terapia celular em humanos e outros animais. Foram utilizados 12 coelhos da raça Nova Zelândia. A medula óssea foi coletada do fêmur utilizando agulha hipodérmica em seringa contendo solução fisiológica estéril com heparina sódica. Em capela de fluxo laminar as amostras foram filtradas e utilizou-se Ficoll seguido da centrifugação para separação das frações obtidas. Foram testados separadamente os meios de cultivo D-MEM e α-MEM, ambos acrescidos de glutamina, aminoácidos não-essenciais, soro fetal bovino e antibióticos. Foi realizada a curva de crescimento em cada meio. Escolhido aquele com melhores resultados, analisou-se o tempo de passagem ou subcultura com densidades de plaqueamento de 1.333 e 4.000 células/cm2 e a curva de crescimento após a criopreservação. O mínimo de 2,0 mL de medula óssea foi obtido de cada local de punção. A separação por gradiente de densidade utilizando o Ficoll mostrou-se pouco eficiente, sendo então abandonada. As curvas de crescimento obtidas com o teste de proliferação demonstraram que a taxa de crescimento das células obtidas no meio D-MEM foi maior e mais regular, com as fases: período lag nas primeiras horas de plaqueamento, pouco distinguível na imagem, seguido do período de crescimento em escala logarítmica até aproximadamente o 7° dia, seguido por decaimento. Foi observado que as células adquirem uma morfologia fibroblastóide e que aderem à superfície plástica, ambas características necessárias para a a definição das células obtidas como células-tronco. A densidade celular ideal de 4.000 células/cm2 se mostrou adequada para a rotina laboratorial, proporcionando a necessidade de passagens celulares a cada sete dias. A metodologia de criopreservação não se mostrou eficiente, uma vez que o número de células obtido foi muito inferior ao obtido com as células frescas. Sendo assim, o presente estudo estabeleceu a metodologia para coleta das células-tronco da medula óssea de coelhos e estabeleceu os parâmetros de cultivo utilizado meio D-MEM modificado com aditivos para se obter passagens a cada 7 dias após plaqueamento na densidade de 4.000 células/cm2. Agradecimentos: CNPq e CAPES. |
| Palavras-chave | medicina regenerativa, terapia celular, células tronco mesenquimais |
| Forma de apresentação..... | Painel |