Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2655
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Microbiologia |
| Setor | Departamento de Fitopatologia |
| Bolsa | Outros |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | FUNARBE |
| Primeiro autor | Thais Carneiro Araujo |
| Orientador | SERGIO HERMINIO BROMMONSCHENKEL |
| Outros membros | Gustavo Adolfo Marin Ramirez |
| Título | Clonagem de genes candidatos a efetores do fungo Phakopsora pachyrhizi visando a sua análise funcional em soja com o uso do vetor pEDV e Pseudomonas syringae pv. glycinea |
| Resumo | A ferrugem asiática da soja, causada pelo fungo Phakopsora pachyrhizi, é uma das doenças de maior impacto e importância que atinge a cultura da soja, provocando severas perdas na produção. Durante a sua interação com a soja, P. pachyrhizi secreta várias proteínas efetoras, com a função de suprimir as respostas de defesa e promover o parasitismo. Por meio do sequenciamento do transcritoma da interação soja-P.pachyrhzi e análises de bioinformática foram identificados vários genes do patógeno que codificam proteínas secretadas. O objetivo deste trabalho é a clonagem desses genes no vetor pEDV (Effector-detector vector) visando a sua análise funcional, para identificação de genes que codificam proteínas secretadas capazes de suprimir respostas de defesa da soja ou serem reconhecidos por proteínas codificadas por genes de resistência desta planta. Por meio de PCR utilizando oligonucleotídeos compatíveis com o método de clonagem Gateway, as ORFs dos genes candidatos foram amplificadas a partir do cDNA sintetizado a partir de mRNA isolado de folhas de soja infectadas, coletadas em diferentes tempos após a inoculação. Os fragmentos amplificados foram clonados no vetor pENTR/D-TOPO, utilizando o pENTR Directional TOPO Cloning Kit, conforme protocolo do fabricante (Life Technologies). Os plasmídeos recombinantes foram transformados em E. coli e a transformação foi confirmada por PCR de colônias usando oligonucletídeos gene-específicos, e por sequenciamento dos plasmídeos recombinantes. A seguir, os genes foram transferidos para o vetor pEDV6.0 utilizando recombinação sítio-específica, conforme protocolo do kit Gateway LR Clonase II Enzyme Mix (Invitrogen). Os plasmídeos recombinantes foram transformados em E. coli e os transformantes foram analisados por meio de PCR de colônias. Os plasmídeos foram isolados das colônias positivas e caracterizados por sequenciamento. Após a confirmação da clonagem, os plasmídeos foram transformados em Pseudomonas syringae pv. glycinea por eletroporação. As colônias transformantes foram identificadas por meio de PCR, crescidas em meio líquido e armazenadas em -80°C na forma de estoque em glicerol. Estudos funcionais em soja utilizando as construções obtidas encontram-se em andamento. |
| Palavras-chave | Phakopsora pachyrhizi, soja, efetores |
| Forma de apresentação..... | Painel |