Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2643
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG, Outros |
| Primeiro autor | Tarsiane Mara Carneiro Barbosa |
| Orientador | Maria Cristina Baracat-Pereira |
| Outros membros | Lanna Clicia Carrijo, Marcos Jorge Magalhães Júnior, Nayara Gusmão Tessarollo, Thiago Rodrigues de Souza Lopes |
| Título | Uso biotecnológico de peptídeos relacionados à patogênese (PR) de plantas cicatrizantes: Captura, expressão e caracterização de defensinas utilizando Separômica, Peptidômica e Bioinformática |
| Resumo | Peptídeos antimicrobianos (AMPs) constituem um mecanismo de defesa primário para diversos organismos e são expressos em plantas de forma constitutiva ou induzidos por infecção. As solanáceas possuem uma grande importância do ponto de vista comercial, a exemplo as plantas de tomate, pimentão e berinjela. Já as plantas medicinais cicatrizantes têm características importantes que são exploradas pela indústria farmacêutica. Dessa forma esse trabalho foi desenvolvido para obter PR-peptídeos de solanáceas e de plantas medicinais, e duas metodologias foram aplicadas. Na primeira estratégia, RNA foi isolado de extratos vegetais e foi ajustada uma metodologia para a captura da informação, construção do cDNA, clonagem e a expressão heteróloga dos peptídeos dessas plantas, para então purificar e caracterizar estruturalmente os peptídeos de interesse por espectrometria de massas, além de posteriores ensaios antimicrobianos. Por técnicas de biologia molecular, foram buscadas sequências de defensinas de plantas em bancos de dados públicos, disponíveis na internet, que foram utilizadas para a construção dos primers, e também sequências utilizadas em outros trabalhos. Foi realizada a extração do RNA e feita a clonagem do cDNA por kit RQ1 RNase-Free DNase (Promega). As etapas para a obtenção do peptídeo clonado, seguindo-se purificação após expressão, estão em andamento e correspondem ao estágio da estudante. Na segunda estratégia, extratos de folhas de tanchagem foram obtidos por duas extrações diferentes: precipitação com sulfato de amônio e com acetona. Extratos de parede celular (EP) de folhas de tanchagem foram fracionados por ultrafiltração (membranas de poros de 30 kDa, 10 kDa e 1 kDa) e foram separados em géis desnaturantes (SDS-Tricina-PAGE) revelados por coomassie blue e prata. EP1-10 foi também submetido à cromatografia de fase reversa (C18-HPLC) em coluna equilibrada em solução A (TFA 0,1%) e eluída em gradiente crescente de solução B (acetonitrila 80% + TFA 0,1%), a 1,0 mL.min-1 (frações de 0,5 ml). Extratos solúveis (ES) foram submetidos à cromatografia, e os eluatos recolhidos e estão sendo analisados por espectrometria de massas MALDI-TOF/TOF, em matriz ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico, por MS e MS/MS. Outros extratos proteicos foram obtidos por meio da precipitação com acetona e novamente pela precipitação salina com Sulfato de Amônio 75% para obtenção de peptídeos dessas amostras. Os extratos obtidos foram submetidos a eletroforese monodimensional e as bandas excisadas foram tripsinizadas e analisadas por espectrometria de massas MALDI-TOF/TOF, assim como as amostras da precipitação com S.A. , em matriz ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico, por MS e MS/MS. (Apoio: PIBIC/CNPq, CNPq, FAPEMIG, FINEP, CAPES). |
| Palavras-chave | Peptideos, Tanchagem, Defensinas |
| Forma de apresentação..... | Oral |