Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2482
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Primeiro autor | Anna Paula Souza Fonseca |
| Orientador | LUCIANO GOMES FIETTO |
| Outros membros | Eulálio Gutemberg Dias dos Santos, Geovane Amaro Teixeira, Murillo Peterlini Tavares, Thamires Righi |
| Título | Purificação e caracterização de uma α-amilase de Bacillus subtilis |
| Resumo | O trabalho apresenta a obtenção da enzima alfa-amilase extracelular de Bacillus subtillis, sua purificação e caracterização. Usando como fonte de carbono o amido de milho 1% (m/v), foi possível obter um sobrenadante, de cultura com atividade de alfa-amilase. Este sobrenadante foi utilizado para a determinação da temperatura e pH ótimos da enzima em questão. As cromatografias de exclusão molecular e de troca-iônica foram utilizadas como etapas de purificação. Após a cromatografia de exclusão molecular (Sephadex G-25) recolheram-se dois pools contendo atividade enzimática, o que sugere diferentes formas de agregação da enzima, devendo-se destacar que o segundo pool gerado por esta etapa apresentou um alto grau de pureza. A troca-iônica realizada com uma resina trocadora de cátions (CM-Sepharose Fast Flow) a partir do primeiro pool obtido pela exclusão molecular apresentou um aumento significativo no grau de pureza da amilase. O gel de SDS-PAGE corado com nitrato de prata confirmou a presença da amilase em todas as etapas da purificação e indica uma elevada concentração desta enzima no segundo pool da exclusão molecular. O ensaio de interferência de íons mostra que os cátions Mn2+ e Fe2+ aumentam a atividade enzimática ao passo que o Cu2+ inibe drasticamente a atividade da enzima. Os parâmetros cinéticos KM e Vmáx obtidos pelo ensaio de cinética enzimática mostram que eles são próximos aos valores encontrados na literatura para a amilase de Bacillus subtilis. Pode-se concluir que é possível obter a amilase de Bacilus subtilis com um alto grau de pureza apenas com uma etapa de cromatografia de exclusão molecular. Além da purificação foi demonstrado que a temperatura de 37oC, o pH 6,0, e a presença dos íons Mn2+ e Fe2+ favorecem a atividade enzimática. Além disso, pode-se concluir que a produção de alfa-amilase de Bacillus subilis possuem aspectos práticos viáveis como, por exemplo, o rápido crescimento da bactéria (12 horas) e a produção da amilase em um curto tempo (24 horas) que são interessantes em uma produção em larga escala. |
| Palavras-chave | Purificação, Bacillus subitilis, amilase. |
| Forma de apresentação..... | Painel |