Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2469
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Biotecnologia |
| Setor | Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Nancy da Rocha Torres |
| Orientador | JULIANA LOPES RANGEL FIETTO |
| Outros membros | Yaro Luciolo dos Santos |
| Título | Avaliação de um protótipo vacinal para leishmaniose canina utilizando a proteína NTPDase 2 de Leishmania infantum chagasi. |
| Resumo | As leishmanioses são doenças de caráter zoonótico consideradas um grande problema de saúde pública. Causadas por protozoários do gênero Leishmania, apresentam uma variedade de manifestações clinicas, acometendo diversos hospedeiros vertebrados, dentre eles, o cão e o homem. Uma das formas de manifestação clínica de leishmaniose é a leishmaniose visceral, de caráter sistêmico e evolução crônica, caracterizada por febre, esplenomegalia, hepatomegalia, causando debilidade progressiva, podendo ocasionar óbito. Como não existe vacina para uso humano e as poucas vacinas para uso em cães não têm eficácia comprovada, a busca pela compreensão dos mecanismos envolvidos na infecção pode fornecer alternativas de detecção e prevenção da doença. Nesse contexto a proteína NTPDase 2 de Leishmania infantum chagasi pode fornecer informações importantes acerca do processo infeccioso, uma vez que sua atuação modula a resposta imune no hospedeiro, facilitando a infecção. O objetivo desse trabalho consistiu na obtenção dessa proteína, de modo que possa ser utilizada em testes de imunogenicidade e eficácia vacinal. Além disso, foi feita a expressão e purificação do antígeno recombinante NTPDase 1 de L. infantum chagasi e clonagem do gene codificante da proteína NTPDase 2 de Leishmania braziliensis no vetor pJET1.2/blunt. O objetivo é expressar e purificar o antígeno recombinante de L. braziliensis, para que ele componha a formulação vacinal com o objetivo de verificar se a maior complexidade proteica da formulação aumenta o potencial vacinal do protótipo. Inicialmente foi feita a clonagem do gene codificante da proteína NTPDase 2 de duas cepas, ET e NSL, de L. braziliensis no vetor pJET1.2/blunt, seguida de confirmação por digestão utilizando a enzima BglII e PCR. Concomitantemente foi feita a expressão e purificação dos antígenos NTPDase 1 e NTPDase 2 de L. infantum chagasi. A construção pET21b-NTPDase 1 e pET21b-NTPDase 2 foram utilizadas para transformar células de Escherichia coli BL21(DE3)RIL para expressão das proteínas recombinantes. A indução foi feita durante 1h utilizando isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) até atingir a DO600 de 0,6. Os pellets correspondentes foram purificados a partir dos corpos de inclusão e a porção final correspondente ao sobrenadante foi filtrada (0,45 µm) e purificada utilizando o sistema FPLC-AKTA (Fast Protein Liquid Chromatography). As alíquotas foram dosadas pelo método de Bradford, dialisadas e analisadas por Dodecil sulfato de sódio-eletroforese em gel de poliacrilamida 10% (SDS-PAGE). O produto final apresentou um alto grau de enriquecimento das proteínas NTPDase 1 e NTPDase 2 de L. infantum chagasi e concentrações de uréia dentro dos padrões requeridos para os testes aos quais ela será submetida. Além disso, foram obtidos clones para as cepas ET e NSL de L. braziliensis, os quais deverão ser sequenciados, analisados e posteriormente clonados no vetor de expressão pET21b. |
| Palavras-chave | Leishmaniose, cão, NTPDases. |
| Forma de apresentação..... | Oral |