Ciência e Tecnologia: bases para o Desenvolvimento Social
20 a 25 de outubro de 2014
Trabalho 2205
| ISSN | 2237-9045 |
|---|---|
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Biológicas e da Saúde |
| Área temática | Clínica e cirurgia animal |
| Setor | Departamento de Veterinária |
| Bolsa | PIBIC/CNPq |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq |
| Primeiro autor | Fabiana Rocha Araújo |
| Orientador | ANDREA PACHECO BATISTA BORGES |
| Outros membros | EMILY CORRENA CARLO REIS, Fabrício Luciani Valente, Renato Barros Eleotério, Rodrigo Viana Sepúlveda |
| Título | Medicina regenerativa: obtenção e caracterização de células-tronco perivasculares do cordão umbilical de cães. |
| Resumo | A terapia celular representa uma nova estratégia para o tratamento de lesões degenerativas e traumáticas. A obtenção de células-tronco a partir de medula óssea é a mais utilizada, porém, o baixo número de células obtidas e comorbidades associadas a coleta estimulam a busca por novas fontes. O presente trabalho teve como objetivo a obtenção e caracterização da célula-tronco perivascular do cordão umbilical (UC) de cães. Para isso, foram coletados três UCs a partir de cesarianas terapêuticas, os UCs foram dissecados e submetidos ao protocolo de digestão enzimática em solução de colagenase e hialuronidase, e incubados a 37°C sob agitação discreta, sendo o tempo ideal para completa digestão determinado com avaliações séricas de 15 minutos. Posteriormente, os vasos foram descartados e a solução centrifugada a 1500 RPM por dez minutos, descartando-se o sobrenadante. O pellet foi então re-suspendido em tampão fosfato salino (PBS) e uma amostra de 50 µL foi retirada para contagem de células utilizando azul de tripan 0,4% e câmara de Neubauer. As células obtidas foram cultivadas em frascos de cultura celular de 25 cm2 na densidade de 3.000 células/cm2 acrescidas de meio de cultura celular (80% de α-MEM, 10% de soro fetal bovino e 10% de antimicrobianos), sendo este meio trocado a cada dois dias. Para obtenção da curva de crescimento, células em segunda passagem (P2) foram cultivadas em poços de 8,96 cm2 na densidade de 4x104 célula/poço sendo o meio trocado a cada 2 dias e, a cada dia, era feita a tripsinização do poço e a contagem do número de células. Já para obtenção do tempo de duplicação, células em P2 foram cultivadas na densidade inicial de 3x105 células em garrafas de cultivo celular de 75 cm2, sendo a tripsinização e contagem das células realizadas a cada 4 dias (independente da confluência) até a décima passagem. Para a caracterização das células obtidas em células-tronco mesenquimais, células de quarta passagem foram submetidas a meios para diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Foi obtida uma curva de crescimento com padrões normais, apresentando uma fase de adaptação, de proliferação e senescência. O tempo médio de duplicação das células inicialmente foi alto (entre 132 a 129 horas), decrescendo até a quinta e sexta passagem, onde apresentou os melhores tempos para duplicação (entre 41 a 48 horas), até a senescência. O ensaio de diferenciação demonstrou a multipotencialidade das células in vitro, que foram capazes de diferenciar-se em osteoblastos, condrócitos e adipócitos, quando submetidas aos meios de indução. Portanto, com base nos resultados obtidos, acredita-se que a utilização das células-tronco obtidas a partir do tecido perivascular do cordão umbilical de cães seja uma fonte potencial para utilização na medicina regenerativa. |
| Palavras-chave | Engenharia de tecidos, cultivo celular, regeneração tecidual. |
| Forma de apresentação..... | Oral |