Resumo |
As quitinases (EC 3.2.1.14) são glicosidases que hidrolisam ligações β(1-4) de resíduos de N-acetilglucosamina da quitina. Essas enzimas podem ser produzidas por fungos nematófagos como um importante fator de virulência durante o processo de infecção de organismos “alvo”. Afim de esclarecer mais rapidamente a influência de certos fatores nutricionais do meio de cultura sobre a produção dessa enzima, é necessário utilizar uma técnica matemática para delinear experimentos, reduzindo a quantidade de ensaios e economizando tempo. Desse modo, o objetivo do presente trabalho foi realizar o screening estatístico dos componentes do meio de cultura para a produção de quitinase pelos fungos nematófagos Monacrosporium sinense (SF53) e M. thaumasium (NF34) visando identificar quais desses componentes eram significativos. Conídios desses fungos foram inoculados em meio contendo farelo de trigo (5g) suplementado com quitina a 1% para produção de quitinase. A umidade foi ajustada para 50% (v/w) utilizando solução de sais contendo K2HPO4 (5,0 g/l) e MgSO4 (0.10 g/l). Após esse período, a quitinase produzida foi extraída e o sobrenadante límpido foi utilizado para os ensaios. A atividade de quitinase foi medida pelo açúcar redutor liberado durante a reação, utilizando o método de DNS. A atividade de quitinase foi determinada em diferentes valores de pHs. Os efeitos de cinco variáveis analisadas (quitina, quitina coloidal, glicose, nitrato de sódio, umidade) sobre a produção de quitinase por fermentação no estado sólido por NF34 e SF53 foram analisados usando o planejamento estatístico Plackett-Burman. Para o isolado NF34 pode-se observar que, nos níveis avaliados, duas variáveis foram significativas (p<0,05) para a produção de quitinase: quitina e NaNO3. Por outro lado, para SF53, pode-se observar que, nos níveis avaliados, apenas a variável glicose foi significativa (p<0,05). Em relação a influência do pH na atividade enzimática, para M. thaumasium, o valor de pH de 5,5 permitiu alcançar os maiores valores. Entretanto, para M. sinense, a maior atividade foi observada em pH 8. Os dados apresentados aqui demonstram que diferentes espécies de fungos nematófagos podem apresentar melhores atividades enzimáticas e consequentemente, melhores atividades predatórias em diferentes condições ambientais. Desse modo, maiores estudos são necessários para que a aplicabilidade dos fungos nematófagos seja viável e cientificamente amparada. |