Das Montanhas de Minas ao Oceano : Os Caminhos da Ciência para um futuro sustentável
20 a 24 de outubro de 2025
Trabalho 21559
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
|---|---|
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Dimensões Sociais: ODS2 |
| Setor | Instituto de Ciências Agrárias |
| Bolsa | FAPEMIG |
| Conclusão de bolsa | Sim |
| Apoio financeiro | CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Hévila Cristina de Brito |
| Orientador | EVERALDO ANTONIO LOPES |
| Outros membros | Cláudio Marcelo Gonçalves de Oliveira |
| Título | Desenvolvimento de protocolos de identificação molecular de Meloidogyne graminis por meio das técnicas LAMP e PCR |
| Resumo | Meloidogyne graminis é um nematoide que infecta diversas plantas da família Poaceae e é particularmente prejudicial a gramados esportivos. Relatada pela primeira vez em campos de golfe no Brasil em 2018, essa espécie representa uma ameaça significativa à saúde do gramado, tornando sua identificação acurada um fator essencial para o controle da disseminação e a implementação de estratégias de manejo. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de identificação molecular para M. graminis utilizando amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) e outro por reação em cadeia da polimerase (PCR). Para o ensaio LAMP, seis conjuntos de primers (Orig, ID141, ID71, ID160, ID8 e ID52) foram projetados para atingir a região 28S do rDNA D2-D3, com cada conjunto consistindo de primers internos (FIP e BIP) e externos (F3 e B3). As condições de reação foram otimizadas avaliando-se proporções de 4:1 ou 8:1 (FIP/BIP para F3/B3), temperaturas de 60, 63 e 65 °C, e tempos de incubação de 30, 45, 60 e 75 minutos. A amplificação do DNA de M. graminis foi possível com o primer ID71 a 65 °C por 60 minutos, enquanto nenhuma amplificação ocorreu com DNA de M. exigua, M. paranaensis, M. izalcoensis, M. arenaria, M. enterolobii, M. javanica e M. incognita. Além disso, com base nos primers ID71 F3 e ID71 B3, desenvolvemos um protocolo de PCR inédito para identificação de M. graminis. A reação de PCR otimizada continha 3 µL de tampão GoTaq G2 5X (Promega), 0,47 µL de dNTPs 2 mM, 0,6 µL de cada primer (10 µM), 0,06 µL de DNA polimerase GoTaq® G2, 2 µL de molde de DNA e 8,33 µL de água livre de nucleases. As condições consistiram em desnaturação inicial a 95 °C por 3 min, seguida de 35 ciclos a 95 °C por 1 min, 68 °C por 1 min, 72 °C por 1 min, com extensão final a 72 °C por 10 min. Os produtos foram visualizados por eletroforese em gel de agarose a 90 V. Quando testado contra DNA de M. exigua, M. paranaensis, M. izalcoensis, M. arenaria, M. enterolobii, M. javanica e M. incognita, o protocolo demonstrou alta especificidade, produzindo banda distinta de 206 pb exclusivamente com DNA de M. graminis. Os protocolos moleculares LAMP e PCR desenvolvidos neste trabalho são específicos para M. graminis e podem ser usados para o diagnóstico rápido e acurado dessa espécie. |
| Palavras-chave | Identificação molecular, Nematoide de galhas, Patógeno de gramados. |
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