Das Montanhas de Minas ao Oceano : Os Caminhos da Ciência para um futuro sustentável
20 a 24 de outubro de 2025
Trabalho 20372
| Instituição | Universidade Federal de Viçosa |
|---|---|
| Nível | Graduação |
| Modalidade | Pesquisa |
| Área de conhecimento | Ciências Agrárias |
| Área temática | Dimensões Ambientais: ODS12 |
| Setor | Instituto de Ciências Agrárias |
| Conclusão de bolsa | Não |
| Apoio financeiro | CAPES, CNPq, FAPEMIG |
| Primeiro autor | Marina Bolela Valentini |
| Orientador | EVERALDO ANTONIO LOPES |
| Outros membros | Felipe Abraão Souza Rodrigues, Rafaela Julia Oliveira Bispo |
| Título | IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE Pratylenchus brachyurus USANDO A TÉCNICA DE AMPLIFICAÇÃO ISOTÉRMICA MEDIADA POR LOOP (LAMP) |
| Resumo | A espécie Pratylenchus brachyurus, conhecida como nematoide das lesões radiculares, é um dos fitonematoides com maior dispersão geográfica no Brasil e apresenta ampla gama de hospedeiros, incluindo culturas de relevância econômica como soja e milho. Os principais sintomas associados à infestação são o aparecimento de lesões escurecidas nas raízes, que comprometem a absorção de água e nutrientes, resultando em redução do crescimento vegetal, menor produtividade e até morte das plantas. Pelo hábito endoparasito migrador, caracterizado pela movimentação intercelular no interior das raízes, provoca destruição tecidual sem formação de sítios específicos, dificultando o desenvolvimento de cultivares resistentes. Os métodos moleculares, com destaque para as técnicas baseadas em PCR (reação em cadeia da polimerase), que permitem elevada especificidade e demandam equipamentos sofisticados e reagentes de alto custo. A técnica de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) é uma alternativa promissora dispensando o uso de termocicladores, sendo rápida e permitindo detecção visual. Para a condução do experimento, populações puras de P. brachyurus foram obtidas a partir de cultivos em quiabeiros mantidos em casa de vegetação. A confirmação da identidade da espécie foi realizada por PCR. Para isso, quinze espécimes foram extraídos de suspensão de solo e, ou raízes, submetidos à extração de DNA e amplificação de DNA conforme Machado et al. (2007). Para o desenvolvimento dos primers para LAMP, utilizou-se a sequência EF693896 do GenBank, correspondente ao gene ribossomal 18S e ao espaçador ITS1 de P. brachyurus. Cinco conjuntos de primers LAMP foram desenhados: ID1, ID4, ID5, ID8 e ID13. Cada conjunto continha os primers FIP, BIP, F3 e B3. A reação LAMP foi otimizada, avaliando variações de temperatura (60, 63 e 65 °C), tempo de incubação (30, 60 e 90 min) e as proporções de primers internos e externos (8:1 e 4:1). A amplificação foi verificada visualmente, pela mudança de coloração do reagente (Warmstart colorimetric master mix) e por eletroforese em gel de agarose a 2%. No método colorimétrico, a mudança de cor de vermelho para amarelo indicava a amplificação de DNA, enquanto a presença de bandas com padrão de escada em gel de agarose era indicativo de amplificação. Os conjuntos de primers ID1 (4:1), ID4 (4:1 e 8:1) e ID13 (4:1) foram eficazes na amplificação do DNA de P. brachyurus após reação a 65 °C por 60 minutos. Em algumas amostras, não houve mudança de cor, mas teve amplificação na eletroforese, necessitando de aprimoramento do procedimento. O protocolo desenvolvido possibilita a amplificação de P. brachyurus em 60 minutos. As próximas fases incluirão a avaliação da especificidade frente a outras espécies de Pratylenchus, análise de sensibilidade comparativa com a PCR convencional, e avaliação da aplicabilidade da técnica em condições de campo. |
| Palavras-chave | Endoparasita, LAMP, diagnóstico |
| Apresentações |
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